小鼠外周血检测MDSC如何分析

小鹿 · 发表于 2020-5-9 09:44:08

   各位老师好，最近做一个小鼠外周血测MDSC的，原本是想免疫磁珠分选获得P-MDSC和G-MDSC，然后再流式分析LY6G和CD11b的MDSC表达。但是这边条件限制做不了分选，所以尝试着血样裂红标记LY6G和CD11b抗体直接检测。    之前浏览了大家小鼠MDSC主要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c,然后LY6G和CD11b在粒细胞、单核细胞都会表达，上机的时候也发现主要集中在“单核”那群细胞
   试着不同圈门分析得到以下结果，不确定哪种方式比较正确，或者我可以选中所有细胞，圈选CD11+，再看LY6G的表达情况吗？
   不知道有没有比较可行的方法不用分选，检测MDSC的？

细胞分群

圈门方式1

圈门方式2

圈门方式3

小鹿 · 发表于 2020-5-10 16:49:35

EI，实验经验不足，还望各位老师指导一下哈。

niwanmao · 发表于 2020-5-11 08:56:41

2017年回答过一个小鼠MDSC的问题，供参考：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6088-1-1.html

小鹿 · 发表于 2020-5-11 10:13:03

niwanmao 发表于 2020-5-11 08:56
2017年回答过一个小鼠MDSC的问题，供参考：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6088-1-1.html ...

嗯嗯，谢谢老师，分析时有借鉴以上帖子，检测MDSC基础的都需要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c这4个吗？像我只标记LY6G和CD11b两个抗体的话来判断MDSC的是不是分群不够充分？

liuruiluna · 发表于 2020-5-11 16:09:30

做分析的话，本来也不用分选吧？直接标记抗体上机看比例么。
一般分选出来的，会拿传出来的细胞做下一步实验，比如培养了，提取蛋白或者RNA的，不了解为啥要分选之后再检测

niwanmao · 发表于 2020-5-11 17:54:45

小鹿发表于 2020-5-11 10:13
嗯嗯，谢谢老师，分析时有借鉴以上帖子，检测MDSC基础的都需要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c这4个吗？像我只标 ...

只有Ly6G和CD11b分不开的。

小鹿 · 发表于 2020-5-12 09:44:04

liuruiluna 发表于 2020-5-11 16:09
做分析的话，本来也不用分选吧？直接标记抗体上机看比例么。
一般分选出来的，会拿传出来的细胞做下一步实 ...

本意可能是想获取总的MDSC细胞，然后看一下其中LY6G和CD11b分群的比例。

小鹿 · 发表于 2020-5-12 09:47:26

niwanmao 发表于 2020-5-11 17:54
只有Ly6G和CD11b分不开的。

好的，了解。感谢老师解答

liuruiluna · 发表于 2020-5-15 14:01:24

小鹿发表于 2020-5-12 09:44
本意可能是想获取总的MDSC细胞，然后看一下其中LY6G和CD11b分群的比例。

这些都可以在不用分选的情况下直接流式分析出来。而且分选过程中也有丢失目标细胞的可能。我个人认为分选不是很必要

小鹿 · 发表于 2020-6-20 11:53:31

niwanmao 发表于 2020-5-11 17:54
只有Ly6G和CD11b分不开的。

老师，我这次增加了两个指标，FITC anti-mouse Ly-6G；PerCP anti-mouse Ly-6C;PE anti-mouse/human CD11b;APC anti-mouse (Gr-1),
结果出来，参照以下两种方式分析：
1.从CD11b+，GR-1那群细胞选择看LY6C/LY6G阴阳性的比例，感觉没办法区分，只有一群细胞；
2.选择从CD11+这群选择看LY6C/LY6G，就有了明显分群；但是两种分析方式感觉结果差很远昂。
这个数据文件，麻烦您帮我看看：

小鼠MDSC.ZIP (5.51 MB, 下载次数: 32)

画门参照1

画门参照2

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[其它临床检测] 小鼠外周血检测MDSC如何分析