不同流式方案检测出结果的差异

@Crystal

两种流式方案，一种是CD3/7-AAD,一种是CD3/CD16CD56/CD19/CD14/CD45/7-AAD,测CD3+%，算法都是在活细胞里面分析CD3含量，两种方法测出的结果差异很大，CV>10%,处理方法一样，也都进行过FCR封闭和FMO对照，想知道大家有没有做过类似的比较，差异多大

niwanmao

不知道你的设门分别是怎么样的。第二种设门可以更精确，可以排除掉一些NKT，排除掉T、B粘连的细胞，排除更多的非特异性信号。第二种更精确，第一种不建议用。

tiger

第一种方法确实没有第二种方法准确，但第二种可简化一下，CD45/CD3/7-AAD即可，差异性就区别在是否用CD45圈门。第一种方法用FCS VS SSC圈门，会圈进一些细胞碎片和裂解不完全的红细胞，CD3的比例会比第二种方法略低。

@Crystal

niwanmao 发表于 2020-5-13 18:02
不知道你的设门分别是怎么样的。第二种设门可以更精确，可以排除掉一些NKT，排除掉T、B粘连的细胞，排除更 ...

第一种是为单纯的测T细胞，第二种为了看免疫分型，两种方法的圈门方式都是先用FSC-A VS SSC-A排掉细胞碎片，再用FSC-A VS FSC-H 排除粘连细胞，之后用7-AAD-A VS FSC-A圈出活细胞，比较CD3+%，为保证一致，就都是在活细胞里面分析CD3+%，测试结果都是第二种低于第一种

@Crystal

tiger 发表于 2020-5-14 08:53
第一种方法确实没有第二种方法准确，但第二种可简化一下，CD45/CD3/7-AAD即可，差异性就区别在是否用CD45圈 ...

都是在活细胞里面圈CD3，基本可以排除细胞碎片和裂解不完全红细胞，都是第二种比第一种结果低，排除人员操作差异，多色配色的干扰是否会造成群体弥散

tiger

@Crystal 发表于 2020-5-14 09:29
都是在活细胞里面圈CD3，基本可以排除细胞碎片和裂解不完全红细胞，都是第二种比第一种结果低，排除人员 ...

楼主强调的是分析CD3+%。再者7-AAD并不能排除裂解不完全的RBC，这个任务只能交给CD45了。

家的感觉

有没有可能第二个方案多色荧光溢漏导致的？

RIVA

百分含量检测毕竟没有绝对计数准确，加不加CD45也影响很大，还要结合具体圈门方式，但是对于检测样本不同处理组间的趋势是一致的。