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[淋巴细胞亚群] 不同流式方案检测出结果的差异

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发表于 2020-5-13 09:32:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
两种流式方案,一种是CD3/7-AAD,一种是CD3/CD16CD56/CD19/CD14/CD45/7-AAD,测CD3+%,算法都是在活细胞里面分析CD3含量,两种方法测出的结果差异很大,CV>10%,处理方法一样,也都进行过FCR封闭和FMO对照,想知道大家有没有做过类似的比较,差异多大

发表于 2020-5-13 18:02:34 | 显示全部楼层
不知道你的设门分别是怎么样的。第二种设门可以更精确,可以排除掉一些NKT,排除掉T、B粘连的细胞,排除更多的非特异性信号。第二种更精确,第一种不建议用。
发表于 2020-5-14 08:53:03 | 显示全部楼层
第一种方法确实没有第二种方法准确,但第二种可简化一下,CD45/CD3/7-AAD即可,差异性就区别在是否用CD45圈门。第一种方法用FCS VS SSC圈门,会圈进一些细胞碎片和裂解不完全的红细胞,CD3的比例会比第二种方法略低。
 楼主| 发表于 2020-5-14 09:21:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-13 18:02
不知道你的设门分别是怎么样的。第二种设门可以更精确,可以排除掉一些NKT,排除掉T、B粘连的细胞,排除更 ...

第一种是为单纯的测T细胞,第二种为了看免疫分型,两种方法的圈门方式都是先用FSC-A VS SSC-A排掉细胞碎片,再用FSC-A VS FSC-H 排除粘连细胞,之后用7-AAD-A VS FSC-A圈出活细胞,比较CD3+%,为保证一致,就都是在活细胞里面分析CD3+%,测试结果都是第二种低于第一种
 楼主| 发表于 2020-5-14 09:29:56 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-5-14 08:53
第一种方法确实没有第二种方法准确,但第二种可简化一下,CD45/CD3/7-AAD即可,差异性就区别在是否用CD45圈 ...

都是在活细胞里面圈CD3,基本可以排除细胞碎片和裂解不完全红细胞,都是第二种比第一种结果低,排除人员操作差异,多色配色的干扰是否会造成群体弥散
发表于 2020-5-14 15:22:37 | 显示全部楼层
@Crystal 发表于 2020-5-14 09:29
都是在活细胞里面圈CD3,基本可以排除细胞碎片和裂解不完全红细胞,都是第二种比第一种结果低,排除人员 ...

楼主强调的是分析CD3+%。再者7-AAD并不能排除裂解不完全的RBC,这个任务只能交给CD45了。
发表于 2020-5-14 17:39:51 | 显示全部楼层
有没有可能第二个方案多色荧光溢漏导致的?
发表于 2020-5-19 12:25:37 | 显示全部楼层
百分含量检测毕竟没有绝对计数准确,加不加CD45也影响很大,还要结合具体圈门方式,但是对于检测样本不同处理组间的趋势是一致的。
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