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[淋巴细胞相关] 第一次做组织流式,想请教关于肠道和肝脏的问题

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发表于 2020-5-19 15:04:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
1.我有一批小鼠样本,想看肝脏里的T和巨噬细胞,但是这一部分肝脏不能全部拿去做流式,我每只最少取样多少能保证顺利完成流式测试。
2.小肠固有层大概能有多少呢,还有PP结和肠系膜呢,看到别人说的,肠道固有层如果操作的好,一只大概分离的量刚好够一次流式测试,真的这么少吗?因此还能不能取出一段做肠道非流式操作了呢。
3.肝脏和肠道固有层能不能不用percoll,加CD45来直接分析。
感谢感谢,实在是拿不准。

发表于 2020-5-19 17:48:01 | 显示全部楼层
小鼠的样本我没做过,没法给你具体的指导。
但是,应该是可以同时做的,只是流式不能做太多管,尽量方案集中到一管里面做。
发表于 2020-5-20 17:33:24 | 显示全部楼层
小鼠肝脏的淋巴细胞提取特别少,整肝提取的话大概1-5X10^6个,而且操作过程中还会损失一部分。建议用40%/70%percoll进行纯化一遍,否则细胞碎片和干细胞等实质细胞干扰非常大。如果你还要做其他检测,建议流式至少要用2/3的肝组织。我也非常赞同倪老师的建议:尽量方案集中到一管。
至于肠组织的没做过。

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发表于 前天 15:58 | 显示全部楼层
这贴看了我就心痛,很不幸被迫做过小鼠肠固有层淋巴细胞的流式检测,还有心脏和肺组织里的淋巴细胞(肺泡灌洗液里的就好测多了),
这么说吧,为了找到最合适的复合消化的方法,各种酶也都排列组合试过了,然而根本没有拿到所谓的固有层淋巴细胞,不是少到不够检测,而是真的拿不到活细胞啊,死活试剂盒染上去,群里就那么丢丢细胞,几乎全是死的,感觉这类实验的门槛好高
楼主good luck
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