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对FSC检测装置做如下改进,即可检测亚微米级颗粒

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发表于 2020-5-27 21:11:28 | 显示全部楼层 |阅读模式

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光散射信号的强度高度取决于所分析颗粒的大小和折射率,所以对于诸如EV(细胞外囊泡)之类的亚微米级颗粒,绝大多数是小于500nm,流式细胞仪在光散射检测方面的缺点就变得显而易见。市场上的流式细胞仪采取了多种方法来改善亚微米级颗粒的检测,例如延长停留时间、应用高分辨率光学器件和不同的散射收集角度。但是,当我们分析病毒感染细胞产生的EV时,就会发现FSC信号的重要性,在这种情况下,可以基于不同的FSC大小来区分含病毒和不含病毒的EV,而不需要对病毒进行专门的染色。这一发现说明FSC信号包含了用于EV亚群分析有价值的信息。
Ger JA Arkesteijn等人在5月27日Cytometryytometry杂志上提出了如下的FSC检测装置结构设计,同时8 mm的遮挡条和200μm的pinhole,可以非常有效地减少光学背景(红色就是背景干扰发出的光,即使从遮挡条外侧通过透镜,也会透射到pinhole的遮挡部分被排除掉),所以能够从FSC通道内的背景信号中可靠地分离出100 nm beads产生的FSC信号,甚至在测量beads和EV时都可以在FSC上进行阈值处理而不会受到大量背景信号的干扰。值得各位做流式细胞仪的厂家参考。
cytoa24036-fig-0001-m.png

下图是检测100nm beads的实测图。以A、B图以荧光为阈值设置通道,E-G是以FSC为阈值设置通道。标准配置(5 mm遮挡条,700μm pinhole)、优化配置(8mm遮挡条,200μm pinhole)。
cytoa24036-fig-0003-m.png


下面的密度图显示了PKH67标记M4T1分泌的EV的测量结果,对比了FSC检测器光学器件的标准配置(5mm遮挡条,700μm pinhole,A,C)和优化配置(8mm遮挡条, 200μm pinhole,B,D,E)。 A和B图处于荧光阈值模式。 C–E图处于FSC阈值模式。
cytoa24036-fig-0004-m.png


Arkesteijn, G.J.A., Lozano‐Andrés, E., Libregts, S.F.W.M. and Wauben, M.H.M. (2020), Improved Flow Cytometric Light Scatter Detection of Submicron‐Sized Particles by Reduction of Optical Background Signals. Cytometry. doi:10.1002/cyto.a.24036
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发表于 2020-5-31 16:34:57 | 显示全部楼层
原理基本看懂了,但是流式图没怎么看懂。
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