请教淋巴细胞增殖问题

dxyshining · 发表于 2011-3-31 09:13:28

想请教各位老师淋巴细胞增殖实验问题，我先分离人PBMC, 再用CFSE标记PBMC,接着用PHA+IL-2刺激PBMC 5天，第五天的时候看到淋巴细胞增殖很好，成团生长，但是我用FACS检测CFSE强度时并没有看到细胞分裂后的CFSE衰减峰，而看到一大团的CFSE荧光，看了别人那么好看的CFSE衰减峰，好羡慕啊，望各位高手指点啊！左边图为对照组，右边为PHA+IL-2组
20110329-无标题.png

stef1981 · 发表于 2011-3-31 09:56:36

我做出来也是跟楼主同样的情况，没有一代一代的峰，而是一个峰，只不过荧光强度有点减弱

niwanmao · 发表于 2011-3-31 12:39:09

dxyshining 发表于 2011-3-31 09:13

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想请教各位老师淋巴细胞增殖实验问题，我先分离人PBMC, 再用CFSE标记PBMC,接着用PHA+IL-2刺激PBMC 5天，第 ...

CFSE可能是有点难做的，我没做过淋巴细胞的培养，但是帮他们研究生测过，似乎跟你们这类结果差不多，不过有几个倒是稍微有5－6代子代出现，但肯定没有标准图形这么漂亮。

我猜测，会不会跟CFSE的浓度有关，因为在PROTOCOL中说到，要尽可能摸索出一个浓度既让细胞能够存活，又能得到足够的荧光强度：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... &highlight=CFSE

dxyshining · 发表于 2011-3-31 13:54:24

哦，谢谢倪老师，看来还需要继续努力努力

zhouyanhong · 发表于 2011-4-7 09:35:12

我帮一个研究生检测过淋巴细胞刺激后CFSE，有的试验结果是可以检测出跟试剂盒上的描述一样的

zhouyanhong · 发表于 2011-4-7 09:35:58

每增加一个分裂周期，就多了一个荧光信号峰

niwanmao · 发表于 2011-4-7 10:02:37

zhouyanhong 发表于 2011-4-7 09:35

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我帮一个研究生检测过淋巴细胞刺激后CFSE，有的试验结果是可以检测出跟试剂盒上的描述一样的
...

能否分享一下那个经典的结果？

ddn111 · 发表于 2011-4-19 09:36:10

这个是浓度没有摸好，CFSE另外一个问题是配制后放置时间长后使用对结果影响很大！放一个以前测的结果！
QQ截图未命名11.jpg

lili · 发表于 2011-4-21 15:19:02

同问:)关注关注关注

niwanmao · 发表于 2011-4-21 16:54:04

lili 发表于 2011-4-21 15:19

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同问关注关注关注

8楼的DDN111经验提示我们，CFSE的浓度和配制时间很关键。http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =1795&fromuid=1

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