找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 1835|回复: 12

[结构和原理] 分选效率问题

[复制链接]
发表于 2020-5-30 18:06:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
不知道大家用BD Aria 3分选的时候的实测细胞数和仪器记录数相差大么,之前分细胞的时候,仪器显示2万,实际细胞数只有1万,大概50%;但最近有人死细胞染DAPI分细胞核,分到50万,实测只有5万左右,相差很大,忘记回测纯度了,但是分选小球回测纯度96%以上,纯度应该没问题,流速也不高,3左右,2000evnt/s ;想请教是什么原因,该怎么改善。

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2020-5-30 18:12:01 | 显示全部楼层
分选我没实际做过,从理论上推测,会不会有可能分选出的细胞喷到管壁上导致细胞死亡。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2020-5-30 19:02:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-30 18:12
分选我没实际做过,从理论上推测,会不会有可能分选出的细胞喷到管壁上导致细胞死亡。 ...

倪老师,因为他们本来就是死细胞,所以不存在这种情况
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2020-5-31 17:44:59 | 显示全部楼层
wwwtangya 发表于 2020-5-30 19:02
倪老师,因为他们本来就是死细胞,所以不存在这种情况

哦,我只注意你这里说的前半段50%纯度那事儿了。

后面DAPI分细胞核的话,由于细胞核小,会不会与处理时的一些碎片啥的信号分不开,所以这个50万的信号里面,真正细胞核的信号应该不多?
这就跟我们平时做分析时也一样,如果圈淋巴细胞,而红细胞裂解不干净的时候,会发现虽然淋巴细胞区域取了1万个细胞,但实际上可能只有1000个是真的淋巴细胞。
你这里虽然仪器显示分选到了50万个细胞核,但实际上这个区域可能很多信号是碎片或其它非细胞核信号,那么就很可能造成这种现象。
仅为推测,供参考。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-6-1 09:41:02 | 显示全部楼层
一般我在仪器调试完成后会用微球实测一下分选100微球在镜下看看微球实际数量,如果太少或者没有的话可能调试参数不好,需要重新调(实际在80-90%就差不多了);分选细胞的时候不太放心的话也可以分选特定数量的细胞在镜下看看细胞数量、状态是不是对的。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-6-1 09:41:30 | 显示全部楼层

分选

分选
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-6-1 10:14:02 | 显示全部楼层
分选模式会影响实际获得的细胞数,得率相对损失细胞少一些。我感觉你说的流速是3也不高,就是2000evnts/s有些高,可以适当稀释样本。还有就是分选后回收的细胞从仪器拿下来后离心损失的多。
之前我们遇到过一个情况,分选时仪器上面显示的很多,最后离心计数相差很远很远,最后发现离心用的15ml离心管装的体积变大,同样的离心力(离心速度)与离心时间,沉淀的细胞量减少,把离心力增大后,计数得到的细胞和仪器显示的明显接近。所以,仪器调试、样本情况、分选参数设置、分选后离心等都会影响。

评分

参与人数 1流星 +2 收起 理由
niwanmao + 2 感谢分享

查看全部评分

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2020-6-2 12:26:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-31 17:44
哦,我只注意你这里说的前半段50%纯度那事儿了。

后面DAPI分细胞核的话,由于细胞核小,会不会与处理时 ...

谢谢倪老师,应该是这个原因,今天分选了细胞验证了一下,细胞数有70%,是正常的。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2020-6-2 12:28:15 | 显示全部楼层
xcl881028 发表于 2020-6-1 09:41
一般我在仪器调试完成后会用微球实测一下分选100微球在镜下看看微球实际数量,如果太少或者没有的话可能调 ...

十分感谢!分微球确实是一个很好的验证方式。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2020-6-2 12:29:03 | 显示全部楼层
sunzheng_99 发表于 2020-6-1 09:41
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MjAwOTd8MWVkNWUyMTF8MTcxMTcyMDI3OXwwfA%3D%3D

谢谢
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2|浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-3-29 21:51

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表