评估MDS的红系，有个不裂红的方法推荐给你们

niwanmao

由于骨髓增生异常综合征（MDS）和非克隆性血细胞减少症的鉴别诊断仍然是血液病理学中的重大诊断挑战。 WHO 2017分类要求在MDS检查中整合临床数据、细胞学和病理形态学检查以及血液和BM标本的细胞遗传学/分子遗传分析。 尽管如此，仍有一半的MDS患者无法通过常规核型分析检测到的细胞遗传学异常（Haase et al，2007），并且10–20％的患者缺乏体细胞突变或只是出现了无血液学症状的老年人中发现的突变（Jaiswal et al，2014 ; Steensma et al，2015）。

WHO将流式细胞术（FCM）在MDS诊断中的作用描述为一种可选的辅助方法，现在已经发布了几种主要基于粒细胞/单核细胞谱系表型异常的评分系统，但是MDS和非克隆性血细胞减少症均存在上述异常，因此评分体系的诊断能力有必要对红系发育异常的整合实现诊断能力的增强。

了解红细胞生成的正常分化和成熟过程对于检测和理解红细胞生成中的流式表型异常至关重要。 先前的流式研究已经借助以下标记物定义了在红系谱系正常成熟过程中观察到的免疫表型模式：CD34、CD117、CD105、CD235a、CD36和CD71（Wangen, Eidenschink Brodersen, Stolk, Wells, & Loken, 2014）。

MDS中与红系发育相关的主要异常是CD36和CD71荧光强度的变异系数（CV）增加，以及CD36和CD71的平均荧光强度（MFI）的降低、未成熟CD117 +红系祖细胞的比例增高。但是，在大多数已发表的研究中，都是采用各种裂解方案来去除红细胞（RBC），尽管据报道裂解方案不会显著影响表达（Wangen et al，2014），但它们确实会影响光散射参数，并导致有核红细胞不可避免的减少，可能反过来导致对有核红细胞群体的低估和对其他细胞比例（包括CD34+原始细胞）的高估。

Despoina Violidaki等人在2020年6月16日的Cytometry B Clin Cytom上介绍了一个不需要裂红的方法，简单的说，就是用DNA核酸染料DRAQ5染有核细胞，无需裂解红细胞，获取时只获取DRAQ5阳性的有核细胞即可，这样可以最大程度的保留有核红细胞各个阶段成份。在2013年Leukemia上面也有篇文章《Flow cytometric detection of dyserythropoiesis: a sensitive and powerful diagnostic tool for myelodysplastic syndromes》用CYTRAK染料染有核细胞（https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7462-1-1.html）。不过今天这个篇文章的重点是雷达图的应用。

设门
选择DRAQ5阳性部分，然后再选择CD45-、CD36+部分，最后通过CD13-CD71+的红系部分。


评估CD105/CD117、CD117/CD36、CD117/CD71、CD105/CD36、CD105/CD71、CD71/CD36的分化，也可以将DRAQ5和5个标记同时放在雷达图上，直接观察多参数的分化轨迹：



与形态学的对比
用这个方法获得的红系比例，与形态学进行对比，可见差异度在可接受的范围之内（Morphology和ERY），而裂解红细胞的方法得到的红系比例，则差异甚大（Morphology和lysis）：



应用
4例MDS异常模式的雷达图。 （a）一例MDS-RS-MLD，其中原幼红（黑色和暗红色）增加，占红系的36％。 （b）一例MDS-EB1的原幼红阶段明显减少，导致“头重脚轻”的分布。 CD117 +粒细胞前体（绿色）也出现较明显增加。 （c）一例出现明显“异常亚群”（粉红色）的MDS-RS-MLD。 （d）一例MDS-EB2，既有原幼红的减少，又有“异常亚群”（粉红色），CD117 +粒细胞前体（绿色）的增加明显。



信源：Violidaki D, Axler O, Jafari K, et al. Analysis of erythroid maturation in the nonlysed bone marrow with help of radar plots facilitates detection of flow cytometric aberrations in myelodysplastic syndromes [published online ahead of print, 2020 Jun 16]. Cytometry B Clin Cytom. 2020;10.1002/cyto.b.21931. doi:10.1002/cyto.b.21931

Phoebe

有一个很基础的问题想请教一下，就是NH4CL溶解成熟红细胞的原理是什么？文献提到了碳酸酐酶。

niwanmao

Phoebe 发表于 2022-5-29 11:18
有一个很基础的问题想请教一下，就是NH4CL溶解成熟红细胞的原理是什么？文献提到了碳酸酐酶。 ...

氯化铵是利用低渗裂解的原理裂解红细胞。