人BALF巨噬细胞分型M1/M2

yohoo

本人小专硕一枚，不是很懂做实验，最近准备做病人支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞分型M1 M2，看了一些文献，想用CD45圈出白细胞，用CD68圈出总的肺泡巨噬细胞，再用CD86标记M1，用CD206/CD163标记M2，不知道这样可以吗？希望各位有实验基础和经验的老师给点建议，十分感谢！

niwanmao

相对比较粗，但是可以做。

yohoo

niwanmao 发表于 2020-6-23 12:18
相对比较粗，但是可以做。

Q1：倪老师，请问怎么样可以更精确一点，是增加流式表面标记物指标还是说增加RT-PCR检测不同巨噬细胞mRNA表达量？
Q2：知网上很多文献是M1、M2单独培养提取各自RNA，但是我想收病人标本后离心取这些混合细胞提取RNA检测一些特异性指标来检测M1/M2比例，这样是可以的吗？
Q3：BALF这个细胞量够不够上流式检测，我问了检测支气管肺泡灌洗液一般细胞计数分类的老师说有核细胞计数一般在1-10*10^7/L，但是很多文献中我看上流式都要求1*10^6/ml
倪老师，我的问题可能有点多，希望您百忙之中可以抽空指导一下，谢谢

niwanmao

yohoo 发表于 2020-6-24 00:10
Q1：倪老师，请问怎么样可以更精确一点，是增加流式表面标记物指标还是说增加RT-PCR检测不同巨噬细胞mRNA ...

表面标记这几个可以的，只是如果能够增加一些功能验证，验证功能性因子当然更好。
不过这个方案基本够用了。
RNA不属于流式范畴，主要是测IL-10/L-12和ARG1/iNOS2 mRNA比例的。
细胞量够用的。

yohoo

niwanmao 发表于 2020-6-27 13:54
表面标记这几个可以的，只是如果能够增加一些功能验证，验证功能性因子当然更好。
不过这个方案基本够用了 ...

好的，倪老师 非常感谢！另外您说的验证功能性因子是指巨噬细胞胞内细胞因子染色吗？

niwanmao

yohoo 发表于 2020-6-28 20:03
好的，倪老师 非常感谢！另外您说的验证功能性因子是指巨噬细胞胞内细胞因子染色吗？ ...

是的。

yohoo

niwanmao 发表于 2020-6-29 08:28
是的。

好的 谢谢倪老师

yohoo

niwanmao 发表于 2020-6-27 13:54
表面标记这几个可以的，只是如果能够增加一些功能验证，验证功能性因子当然更好。
不过这个方案基本够用了 ...

倪老师 取了病人BALF，染色后结果不理想，巨噬细胞M1、M2分群不明显 ，我一般是染色后用多聚甲醛固定 隔天上机检测，这个对染色结果影响大吗？因为我看教材中都提到巨噬细胞是贴壁细胞

niwanmao

yohoo 发表于 2020-7-18 21:53
倪老师 取了病人BALF，染色后结果不理想，巨噬细胞M1、M2分群不明显 ，我一般是染色后用多聚甲醛固定 隔 ...

取到样本后，立即染色，不要固定。