关于细胞凋亡检测的问题

Chemericcat

大家好，我最近在做细胞凋亡。用的染料是TMRM+SYTOX RED +ANNEXIN V. 如图所示。
黑色代表sytox+annexin v+, 蓝色代表TMRM+, 红色代表annexin V+
想请问大家，TMRM+的细胞群其中一部分被认为是SYTOX+好像不太对(设门是根据FMO control)？是因为我的补偿没调好吗？
谢谢

niwanmao

FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响，不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面，还有其它背景影响。
我的建议是新鲜样本来做这一块的阴性对照。

Chemericcat

niwanmao 发表于 2020-7-3 21:38
FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响，不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面，还有其它背景影响 ...

感谢倪老师的解答，新鲜样本的意思是？我的样本是细胞系

niwanmao

Chemericcat 发表于 2020-7-4 01:41
感谢倪老师的解答，新鲜样本的意思是？我的样本是细胞系

新鲜样本我指的是新鲜采集的全血样本，染一下sytox red确定界限。
如果你用的是细胞系，并且培养状态良好，那么应该基本上都是阴性的，所以我觉得FMO在这里是反映不了真实界限的，因为死细胞和活细胞能够很好分群的。

Chemericcat

niwanmao 发表于 2020-7-4 10:15
新鲜样本我指的是新鲜采集的全血样本，染一下sytox red确定界限。
如果你用的是细胞系，并且培养状态良好 ...

所以我在做FMO的时候一般会加入活细胞mix一些加热后的死细胞，但即使这样，在用到实验样本的时候还是会有些对应不上。
倪老师您建议我换sigle staining作为control吗

Chemericcat

Chemericcat 发表于 2020-7-6 20:49
所以我在做FMO的时候一般会加入活细胞mix一些加热后的死细胞，但即使这样，在用到实验样本的时候还是会有 ...

如图所示

niwanmao

Chemericcat 发表于 2020-7-6 20:53
如图所示

活细胞+死细胞，那不叫FMO，而是阴性对照和阳性对照混合了。
单纯活细胞的染色结果如何？
混合样本里面哪群是死，哪群是活？

Chemericcat

niwanmao 发表于 2020-7-7 18:30
活细胞+死细胞，那不叫FMO，而是阴性对照和阳性对照混合了。
单纯活细胞的染色结果如何？
混合样本里面哪 ...

我曾经用过活细胞染色，但里面还是会有部分死细胞。。。如图1所示，右边那群较大的是活细胞，左边那群较小的死细胞.图2是我的FMO-Sytox red conrol

Chemericcat

Chemericcat 发表于 2020-7-8 18:00
我曾经用过活细胞染色，但里面还是会有部分死细胞。。。如图1所示，右边那群较大的是活细胞，左边那群较 ...

                               
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多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2020-7-3 21:38
FMO对照主要是为了排除补偿带来的影响，不能排除所有的背景干扰。所以考虑你的实验里面，还有其它背景影响 ...

老师您好，我想检测肺单个核细胞中的 中性粒细胞的凋亡实验，我需要先对细胞进行表染处理，CD11b，Ly6G，然后按着Annexin V的试剂盒继续操作可以不，荧光抗体和调往试剂盒错开搭配。