细胞表面分子表达量的流式分析定量

lorrainefang · 发表于 2020-7-14 18:49:55

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请问大家有没有做过某个细胞的表面分子（单峰连续表达），因为MFI每次实验都会出现差异，组内差异较大，有没有其他比较好的方法比较某种分子在细胞表面的表达量？

niwanmao · 发表于 2020-7-14 19:17:33

1、首先保证仪器性能上的稳定。
2、其次，保证染色步骤的标准化，尤其是染色体积和抗体用量。
3、注意排除死细胞。
这三点做好了，肯定不会出现如此大的差异。

PS：发帖请务必选择提问大版，不要发在流式杂谈版块，流式杂谈是分享流式经验的。这次先帮你转移过去。为了论坛秩序，请谅解。

飞翔 · 发表于 2020-7-15 08:54:03

这种有定量方法吗？也想知道

niwanmao · 发表于 2020-7-16 07:24:40

飞翔发表于 2020-7-15 08:54
这种有定量方法吗？也想知道

有荧光定量微球可以做出标准曲线，然后再测该分子实际MFI，在曲线上找出对应的分子数。

hannotech · 发表于 2021-12-15 10:46:34

有两种方法可以定量，一是直接用荧光微球定标准曲线；一种是利用二抗模拟抗原定标。一般用荧光微球多一些，二者在选择时都要注意荧光的种类。

飞翔 · 发表于 2022-2-11 10:36:46

你们用的定量微球是什么厂家的呀

飞翔 · 发表于 2022-4-8 15:39:45

niwanmao 发表于 2020-7-16 07:24
有荧光定量微球可以做出标准曲线，然后再测该分子实际MFI，在曲线上找出对应的分子数。 ...

最近打算做这种实验，是不是的先摸索一下细胞与抗体结合，选择一个饱和结合的点进行定量

汀雅 · 发表于 2022-6-8 11:12:08

niwanmao 发表于 2020-7-16 07:24
有荧光定量微球可以做出标准曲线，然后再测该分子实际MFI，在曲线上找出对应的分子数。 ...

老师，请问具体怎么做呢？有帖子是讲这个的吗，可不可以附一下链接呢？

hannotech · 发表于 2023-9-21 09:37:38

汀雅发表于 2022-6-8 11:12
老师，请问具体怎么做呢？有帖子是讲这个的吗，可不可以附一下链接呢？ ...

还需要吗？

AAAAAjjj · 发表于 2023-9-21 10:07:03

hannotech 发表于 2023-9-21 09:37
还需要吗？

老师，可以发一下吗？我有点需要这个。谢谢老师

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[标本处理] 细胞表面分子表达量的流式分析定量