小鼠骨髓、脾脏、小肠、肺、皮肤的DC/单核/巨噬设门步骤

niwanmao

小鼠DC目前分为经典DC（cDC）和浆细胞样DC（pDC），cDC进一步细分为cDC1（淋巴组织中为CD11b- CD8 +或非淋巴组织中为CD11b- CD103 +）或cDC2（CD8 / CD103- CD11b +SIRPα+细胞）。尽管所有cDC在整个组织中均表达高水平的CD11c和MHCII，但pDC却是CD11c int细胞，其特征性表达诸如SiglecH、B220和mPDCA-1的标记，而缺乏CD11b的表达，甚至最近的一些研究认为pDC可能是淋系来源的。
朗格汉斯细胞（LC）是表皮特异性抗原呈递细胞，由于它们表达CD11c、CD11b和MHCII并显示迁移至淋巴器官，因此最初被归类为DC家族成员。然而，LCs显示出更多来自胎儿巨噬细胞来源，因此，这些细胞现在已被归类为表皮中的常驻巨噬细胞。
单核细胞也是异质的，已被分为两个亚群：炎性CXCR1hi CCR2-CD62L-CD43hi Ly6Clo和巡逻CX3CR1int CCR2+ CD62L+ CD43lo Ly6Chi单核细胞。稳定状态下募集到组织中的Ly6Chi MHCIIlo单核细胞连续分化为Ly6Clo MHCIIhi巨噬细胞，一种现象称为单核细胞到巨噬细胞的“瀑布现象”，主要存在于肠道和皮肤中。

下面依次是小鼠骨髓、脾脏、小肠、肺、皮肤的DC、单核、巨噬的五幅分析设门步骤图，为方便大家理解，我在图上做了标注，不过相同的思路不重复标注，所以请务必从头到尾逐一看下去：



假如看完还是不能理解，可到原文（https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31633216/）细看。看完还是理解不透，那么就老老实实按照图片照猫画虎吧。


参考文献：Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur J Immunol. 2019;49(10):1457-1973. doi:10.1002/eji.201970107

毛豆24821

图A,B,C都是来源于小鼠脾脏，图A文献圈的小鼠脾脏巨噬是CD11b-/low F4/80hi CD64+。 图B文献圈的小鼠脾脏巨噬是CD11blow F4/80hi。图C圈的是我们自己做的小鼠脾脏，圈CD11b+F4/80hi，数量比例要远小于文献中，请问CD11b不表达的部分到底算不算小鼠脾脏巨噬，naive小鼠脾脏中巨噬细胞范围大概多少？谢谢
A:

图A

B:

图B

C:

图C

niwanmao

毛豆24821 发表于 2022-11-3 16:04
图A,B,C都是来源于小鼠脾脏，图A文献圈的小鼠脾脏巨噬是CD11b-/low F4/80hi CD64+。 图B文献圈的小鼠脾脏巨 ...

巨噬细胞本身有异质性，应该是可以，只是我感觉关键是不是你把F4/80的电压再调高一些，目前的坐标看起来是明显电压偏低的，然后设门的时候，可参照文献的坐标进行一一对应。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2022-11-3 16:42
巨噬细胞本身有异质性，应该是可以，只是我感觉关键是不是你把F4/80的电压再调高一些，目前的坐标看起来 ...

小鼠脾脏：

spleen

比如这个脾脏中，如果把CD11b-F4/80hi圈为巨噬，虽然表达CD68，但是SSA会不会偏小，不像是巨噬。因为同小鼠的腹水（下图）中巨噬的SSA是在比较高的位置的，那是不是认为脾脏中这群CD11b-F4/80hi不能算做巨噬？

小鼠腹水：

hydwl2019

这个LIN的意思是啥啊，CD3 CD19随便选一个来标？

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-30 02:03
这个LIN的意思是啥啊，CD3 CD19随便选一个来标？

3、19、49b、Ly6G这四个全要加，同一荧光素 ，只圈阴性细胞，以排除干扰的细胞。

yu1993

帖子有点久了，关于染色步骤想请教个问题。小鼠样本染色前处理的FC阻断，是否有推荐的替代，目前用的是商用化阻断剂。

潘臻

商业阻断剂的效果不好吗？
BSA，FBS这些血清也是有阻断效果的，但应该不会比专门的Fc blocker好吧？
具体的没有尝试过。您有新发现的话，也欢迎分享。

duhaoming008

请教一下脾脏的CD8a可否换成CD8b？