流式监测CD19 CAR T细胞的染色操作

niwanmao

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法无疑正在引领癌症疗法的一场革命。 CAR T细胞疗法作为血液恶性肿瘤的有效治疗方法最近取得的成功已引起人们对免疫治疗领域的极大兴趣。 基因改造T细胞的巨大潜力现在扩展到实体瘤、自身免疫和传染病领域。
输注CAR T细胞后，CAR T细胞的增殖是抗肿瘤功效的关键，它可能取决于多种因素，例如CAR构建体的结构、制造过程、淋巴去除方案、输注的细胞表型、肿瘤负荷和疾病。 CAR T细胞群体的持久性也被认为是抗肿瘤功效的关键因素。
CAR T细胞还可引起毒性，从机制上将其分为两类：（a）与T细胞活化和随后的系统性高水平细胞因子释放有关的一般毒性； （b）由CAR和非恶性细胞表达的靶抗原之间的特异性相互作用引起的毒性，称为靶标、非肿瘤效应。
考虑到治疗的复杂性和细胞扩增的异质性，所以必须在治疗后监测循环CAR T细胞数量。 用流式细胞术检测是最高效的和直接的方法。这里介绍一下2020年8月25日Cytometry B杂志上Demaret J等人带来的两种检测方法，这些检测方法，比当初CAR T刚问世时，已经简单、特异很多了。
a：Acro Biosystems的FITC-CD19蛋白
b：Acro Biosystems的PE-CD19蛋白
c：美天旎的CD19蛋白-biotin做一抗，biotin-PE做二抗，间标
可见c图分群最好。a和b均用BCMA做设门对照。


在正确圈出CAR-T细胞之后，就可以对CAR-T细胞进行细胞亚群分析（下面的a-d图）。至于下面的e图是看背景荧光水平，f图是用BCMA FITC作为设门依据，从而能在c图这样分群不清的时候正确分析CAR-T细胞比例。



CAR-T细胞的比例分析可能不难，难在找到分群好的抗体，实现稳定的结果。看了上面的数据，你心里有数了吗？

信源：Demaret J, Varlet P, Trauet J, et al. Monitoring CAR T-cells using flow cytometry [published online ahead of print, 2020 Aug 25]. Cytometry B Clin Cytom. 2020;10.1002/cyto.b.21941. doi:10.1002/cyto.b.21941

qiulinluo

《Monitoring CAR T-cells using flow cytometry》

wyandsxw

倪老师，非常感谢这篇文章，我们正在进行这方面的流式分析方法开发，请问有原文pdf么？

wyandsxw

qiulinluo 发表于 2020-8-26 18:53
《Monitoring CAR T-cells using flow cytometry》

这是我们亲爱的小罗么？

lgbu08696

感谢分享

特勒兮兮

倪老师，这个是测细胞的CAR,我想问一下如果用这个间标的试剂测外周血里面的CAR阳性怎么测呢，是先裂红测，还是先加CD19的生物素，洗两遍加了二抗，洗完了再裂红呢，还是怎样，因为一直找不到文章，倪老师知道吗？？？或者是有什么建议。。。

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2020-9-2 17:21
倪老师，这个是测细胞的CAR,我想问一下如果用这个间标的试剂测外周血里面的CAR阳性怎么测呢，是先裂红测， ...

先染好，最后裂红。

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2020-9-2 21:21
先染好，最后裂红。

因为加完1抗要洗，所以对用PBS洗涤血液这一步感觉迷之不靠谱~~~~

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2020-9-7 10:54
因为加完1抗要洗，所以对用PBS洗涤血液这一步感觉迷之不靠谱~~~~

为啥呢？担心丢细胞吗？