小鼠外周血裂红

王风

各位同仁，请教下有关小鼠外周血裂红的问题。用的是nsg小鼠，种的人白血病模型，取眼球血裂红，已经加码到10*裂红液：dd水=1:7，1ml外周血用5ml稀释后的裂红液常温裂解10分钟，但是裂红效果还是很差，不知道各位有什么建议？谢谢！

niwanmao

你这里的红细胞裂解液是什么成份？

sunzheng_99

1    个人建议  1ml外周血用10ml稀释后的裂红液常温裂解10分钟.裂解时颠倒混匀
2  您指裂红效果还是很差指什么？ 肉眼看？上流式图形不对？
3 现在市场破红液质量还行吧

王风

niwanmao 发表于 2020-9-7 08:47
你这里的红细胞裂解液是什么成份？

就是买的商品化的裂红液，非医用，不含固定剂，具体成分还不知道。。。

王风

sunzheng_99 发表于 2020-9-7 08:56
1    个人建议  1ml外周血用10ml稀释后的裂红液常温裂解10分钟.裂解时颠倒混匀
2  您指裂红效果还是很差指 ...

我们一共裂了两遍第一遍是5ml，第二遍是10ml，但是底部还是可以看到明显红色沉积，流式图回复插不了

王风

这是上流式后的图

niwanmao

王风 发表于 2020-9-7 15:15
这是上流式后的图

分群倒是还可以的。如果确实裂不掉也没关系，将获取时的阈值提高到4万左右，就可以基本上排除红细胞碎片了。

王风

niwanmao 发表于 2020-9-8 07:30
分群倒是还可以的。如果确实裂不掉也没关系，将获取时的阈值提高到4万左右，就可以基本上排除红细胞碎片 ...

哦哦 谢谢倪老师！我下次试试，之前裂红裂不干净，流式好几次都没染上这次染得还行。。但是也遇到了一些问题不能解释，等把结果整理出来，再跟倪老师请教下。

niwanmao

王风 发表于 2020-9-8 17:23
哦哦 谢谢倪老师！我下次试试，之前裂红裂不干净，流式好几次都没染上这次染得还行。。但 ...

你下次也可以先进行裂解，用500ul外周血+5ml稀释后的裂解液。如果还不行，尝试自己配制氯化铵裂解液（站内有配方）。

RIVA

王风 发表于 2020-9-8 17:23
哦哦 谢谢倪老师！我下次试试，之前裂红裂不干净，流式好几次都没染上这次染得还行。。但 ...

您手中的溶血素不知道是几倍的，一般市面上的溶血素都是十倍稀释的。如果感觉是溶血素的问题，先用100ul外周血加1ml1乘溶血素，溶血10分钟，试一下。如果溶不干净，很有可能是溶血素的问题。一般小鼠溶血都还好。