小鼠脾脏FSC-SSC

immunology

小鼠脾脏流式FSC-SSC在淋巴细胞位置常常分为两群，后续分析的时候是否这两群都要圈上，还是只圈第二群？
1.如图，C57小鼠脾脏FSC-SSC在淋巴细胞位置（即图1中标号2,3位置）分为两群，经过反圈门CD3分析，发现CD3阳性群在这两群上都有表达（见图2）。
2.原来我做过分析，FSC-SSC图的标号2（即淋巴细胞位置靠前的一群）用赛默飞死活染料near-IR染色后，发现这群细胞都呈阳性，可能说明大部分都是死细胞？
所以分析的时候这群细胞到底圈不圈上作为目标细胞分析？

niwanmao

1是碎片，2是凋亡的细胞。
3是正常淋巴细胞，4可能是某些淋巴细胞发生活化增大。
所以要圈3、4之后，再用CD3设第二个门。或者直接用CD3设门。

immunology1988

谢谢老师！

immunology

niwanmao 发表于 2020-9-16 07:43
1是碎片，2是凋亡的细胞。
3是正常淋巴细胞，4可能是某些淋巴细胞发生活化增大。
所以要圈3、4之后，再用CD ...

第4群在naive小鼠脾脏也有，就是不做任何处理的小鼠。
并且在FSC-H和FSC-A不在对角线上，而是在对角线上侧。这群细胞一般认为是粘连细胞还是活化细胞？如果是活化细胞，我觉得4群的SSC就太小了吧？
其实我一直纠结是只圈3还是3、4都圈？

immunology

niwanmao 发表于 2020-9-16 07:43
1是碎片，2是凋亡的细胞。
3是正常淋巴细胞，4可能是某些淋巴细胞发生活化增大。
所以要圈3、4之后，再用CD ...

并且我们动物房都是SPF级认证的，两道缓冲间那种。但是偶尔会发生鼠螨感染什么的，但总体来说应该比较干净。所以不知道很干净的环境下是否会有第4群？

niwanmao

immunology 发表于 2020-9-23 00:51
第4群在naive小鼠脾脏也有，就是不做任何处理的小鼠。
并且在FSC-H和FSC-A不在对角线上，而是在对角线上 ...

如果是粘连体，那就不算。
你说的对，是需要事先排除粘连体的。