当CFSE测细胞增殖出现单峰左移，不要怀疑自己

niwanmao

流式中文网一直以来，是流式爱好者的网上家园，我们不为名、不为利，只为一个干净、纯粹的技术交流场所。正是如此，精彩的内容时不时会出现。
我们的老站友，浙江大学邵逸夫医院沈筱芸老师，昨天给我发来一段微信，希望分享一段关于CFSE染色的经验，让各位研究生能够少走些弯路，顺利做完实验，在此表示非常感谢。
这段经验其实很简单，CFSE我们通常希望能够跑出漂亮的多峰图形，父代 ~ 子代，一代代的都分隔清楚（参见https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2370-1-1.html），但是不少FLOWER做的都是肿瘤细胞，结果同样CFSE染色，愣是跑不出多峰图，做到最后，让人怀疑人生。

按照沈筱芸老师的经验，她们做了很多肿瘤细胞，都是如此，最后发现有文献研究了此现象的机制，怀疑与肿瘤细胞主动外排染料导致：



从文献中的图看，虽然没有形成多峰，但是CFSE荧光强度还是能与分裂代数形成一定的线性关系：



相关文献及其附件附于此，在做肿瘤细胞CFSE增殖实验的FLOWER们可下载参考：
细胞增殖实验.pdf (648.37 KB, 下载次数: 268)

2020-9-24 16:09 上传

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cytoa23105-sup-0002-suppinfo2.doc (120.5 KB, 下载次数: 111)

2020-9-24 16:09 上传

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cytoa23105-sup-0001-suppinfo1.docx (2.48 MB, 下载次数: 110)

2020-9-24 16:09 上传

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这种实战经验，相信是各位FLOWER最需要的，所以期待所有热心FLOWER都能像沈老师那样，乐于分享，帮助世界上正在做流式的其它人。

tiger

niwanmao 发表于 2020-10-13 08:02
目前只是发现了这个现象，机制尚不明确。
有兴趣的话可以深入研究一下。 ...

T淋巴细胞具有干细胞特性，在激活状态并在生长因子的作用下可分裂增殖，但每一代都会有一部分细胞处于G0期，所以在染了CFSE后会出现连续的几个峰。而肿瘤细胞G0期很少或没有，所有的细胞都分裂增殖了，不论在那个时间点测试，都只有一个左移峰。不知是不是这个道理。

侯效林

感谢沈筱芸老师和倪老师，正是你们的经验分享使我们少走了很多弯路，再次感谢！

南瓜妹妹

很好的实验经验分享，谢谢各位老师的分享！

qyj2017

很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗

niwanmao

qyj2017 发表于 2020-10-1 17:02
很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗

Modfit软件里面，有标准的程序化自动拟合。

btx362237729

感谢分享

Veblen

老师，您好coculture那个图没太看懂，是指细胞从母代开始同步增殖对吧，既然同步增殖，在某个时间点就应该只有某一代的细胞，那为什么我看DAY2 DAY3 DAY4里面怎么会有好几个峰呢？同时这几个峰荧光强度还不呈现2倍关系。请老师讲解一下怎么看图哈，谢谢

niwanmao

Veblen 发表于 2020-10-9 22:35
老师，您好coculture那个图没太看懂，是指细胞从母代开始同步增殖对吧，既然同步增殖，在某个时间点就应该 ...

不同的细胞系，增殖速度会不同，而且同一时间点，可能有一代，也可能两代。荧光强度不是2倍，不能用细胞周期的思维来推，因为CFSE并不是对半分的。

Veblen

niwanmao 发表于 2020-10-10 10:23
不同的细胞系，增殖速度会不同，而且同一时间点，可能有一代，也可能两代。荧光强度不是2倍，不能用细胞 ...

那我可不可以这样理解，基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰？

niwanmao

Veblen 发表于 2020-10-11 17:36
那我可不可以这样理解，基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰？ ...

不好意思，我前面说错了，是均分到子代。只是因为用LOG坐标，所以看不出类似周期那样减半的分布，但是代数之间能够分开。只是在淋巴细胞上面由于父代存在时间长，所以各代之间分隔比较明显。而前面这些肿瘤细胞系，却分裂速度快，所以父代很快就没，大家几乎同步进入下一代，所以形成逐步左移的现象。