Flowjo的荧光通道是不是和Beckman的FC500设置不同？

cellprobe

昨天用PE荧光抗体标记干细胞的阴性标志物，在 Beckman FC500的FL2 通道上是阴性的，
可是当把数据用Flowjo V10分析的时候，Flowjo FL2通道的阳性比例是99%，标志物变成阳性的了.
为什么？
Flowjo不能分析Beckman流式的数据吗？

顺便说一下：个人觉得CXPcytometer Analysis不如Flowjo好用，所以就尝试用Flowjo分析FC500产生的数据。

niwanmao

不会，可能性比较大的是不是通道对应错了？

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-9-28 08:01
不会，可能性比较大的是不是通道对应错了？

倪老师，FC500上PE是FL2通道，Flowjo上PE也是FL2通道，但是前者是阴性，后者是强阳性。

niwanmao

cellprobe 发表于 2020-9-28 11:17
倪老师，FC500上PE是FL2通道，Flowjo上PE也是FL2通道，但是前者是阴性，后者是强阳性。 ...

Flowjo作为兼容性比较好的第三方软件，理论上不应该出现这样的问题。可以传一个LMD文件上来看看。

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-9-28 12:43
Flowjo作为兼容性比较好的第三方软件，理论上不应该出现这样的问题。可以传一个LMD文件上来看看。 ...

倪老师，这个文件在FC500的cytometer/analysiis上FL2都是阴性的，
但是用Flowjo v10分析，FL2是阳性的。
a-IgG是IgG染色的；a-Ab是抗体染色的。

niwanmao

cellprobe 发表于 2020-9-28 13:45
倪老师，这个文件在FC500的cytometer/analysiis上FL2都是阴性的，
但是用Flowjo v10分析，FL2是阳性的。
...

不知道你的方案和各通道的标记是什么，从分布看，FL2应该是阴性的，是否FlowJO的坐标你未调整到位？

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-9-28 14:38
不知道你的方案和各通道的标记是什么，从分布看，FL2应该是阴性的，是否FlowJO的坐标你未调整到位？

...

我是在IgG染色样本FL2通道 gate右边1%以内画门，然后把门拖到Ab染色的样本，结果显示Ab染色的样本的门的右边的比例是99%，所以我认为是阳性的。


Flowjo坐标的问题，我晚上回去看看。

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-9-28 14:38
不知道你的方案和各通道的标记是什么，从分布看，FL2应该是阴性的，是否FlowJO的坐标你未调整到位？

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倪老师，我用Flowjo V10分析数据，为什么坐标轴是这样的？和您的不同。
为什么呢？