流式细胞术检测AML患者外周血与骨髓中MRD的对比

niwanmao

通过多参数流式细胞术(MFC)或分子手段检测低水平白血病细胞(“可检测残留病”，MRD)的分析方法越来越多地用于急性髓系白血病(AML)患者的治疗过程。通常在骨髓抽吸物(BMA)中进行评估，MRD结果具有显著的预后意义。这引起了人们对使用MRD检测来提高预后准确性、对患者进行风险分层、检测早期复发以及为药物测试提供替代生物标记物的兴趣。 然而，MRD测量的频率受到BMA操作有创性的限制。 MFC的早期结果显示PB和BMA MFC之间具有很强的一致性，如果外周血(PB)样本MRD检测能够达到与骨髓相似的准确度，那么这一限制就可以克服。
为此，美国华盛顿大学血液学系医学系的Colin D. Godwin等人在大队列中进一步确认PB和BMA MFC的一致性。他们从AML和血液病理学数据库的477名成人AML患者中找出724个「配对」的BMA和PB样本（如果PB和BMA样本检测时间差在一周内，则被认为是“配对的”）。患者的中位年龄分别为59岁(范围19-84岁)，其中6%、61%、25%和8%的患者分别对应的是“好”、“中等”、“差”和未知的细胞遗传学预后特征。在2008-2018年和2008年前，分别有94%和6%的患者在该中心接受了评估。 如前所述，使用三管10色MFC方案进行检测，除特殊说明之外，任何程度的残留病都被认为是MRD pos。
下图中，A图是所有724例配对PB和BMA样本的MRD比例相关性分析，Spearman相关系数为0.92；B图为477名患者每人第一次检测MRD时PB和BMA结果的相关性，相关系数为0.91；C图是图一天抽取的PB和BMA样本（323例）的相关性，相关系数0.93；D图和E图分别为移植后30天内PB和BMA配对样本（32例）、90天内PB和BMA配对样本（64例）相关性分析，相关系数均为0.92；F图为形态学和多色流式原始细胞均<5％（209例）PB和BMA配对样本的相关性，相关系数降到0.8，但是后面可以看到，特异性仍然非常高。



阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）、灵敏度（Sn）、特异度（Sp）见下表，表中各部分统计的数据依次为所有724例配对样本、477名患者首次检测的配对数据、同一天采集的配对数据、移植前采集的配对数据，移植后90天内采集的配对数据、形态学和多色流式原始细胞均<5％（209例）PB和BMA配对样本、形态学和多色流式原始细胞均<5％但流式以0.1％为Cut-off值的PB和BMA配对样本。可见总体的灵敏度和特异度较高，但移植后的假阴性开始增多。当按照ELN AML MRD工作组的建议使用0.1%的异常原始细胞作为MRD pos样本的截断值时，PB的敏感性和NPV就分别降低到62%和85%，而特异性和PPV仍然很高。



但是，研究者再次检查了PB/BMA MFC结果不一致患者的结果，再次将任何水平的MRD视为MRDpos，而不是0.1％为cut-off值，发现了：
（1）7对PBpos/BMAneg的样本，对应的是6名患者，这些PB样本原始细胞百分率中位数为1.9%(0.01~6.9%)。 6名患者中有4名(67%)在随后20天(范围7-42天)的后续检查中出现了可检测到的BMA残留病，3/4随后接受了HCT。 其余2/6的患者在MRD检测后1个月内接受额外治疗，然后在4-6个月内接受HCT。
（2）12对PBneg/BMA pos样本，对应的是12名不同的患者。 骨髓原始细胞比例的中位数为0.17%(范围0.003-3.8%)。 4/12例(33%)在平均113天(范围29-288天)内出现形态学复发。 8例无形态学复发的患者中有6例接受了预防形态学复发的治疗，其中4/6的患者接受了HCT的下一步治疗。
这是目前看到的AML多色MRD PB和BMA配对分析样本数最大的一个研究。 虽然0.1%的原始细胞被建议作为MFC MRDpos的临界值，但在这个研究中表明，用这个阈值会导致敏感度会降低，既往研究表明，任何水平的异常原始细胞都具有预测意义。


作者归纳他们研究的缺陷是：
（1）考虑到这项研究的回顾性性质，我们的队列包括较年轻的患者，没有在特定的时间进行PB MFC，也可能存在其他偏倚。
（2）我们的发现是否可以扩展到其他MRD检测技术也是未知的。
（3）MFC技术并不统一，我们的结果可能不适用于其他经验较少的中心。
尽管如此，该研究的证据表明PB的MRD和BMA的MRD高度一致，具有潜在的临床意义。 虽然MRD监测的频率可能会受到成本的限制，但PB MFC的检测频率可以比骨髓高得多，可以取代一些BMA研究，而不会显著降低敏感性和特异性。 因此，PB MFC检测可以促进连续监测，从而为AML患者和提供者提供额外的信息，以指导预后和治疗。
参考文献：Godwin CD, Zhou Y, Othus M, Asmuth MM, Shaw C, Gardner KM, Wood BL, Walter RB, Estey E. Acute Myeloid Leukemia Measurable Residual Disease Detection by Flow Cytometry in Peripheral Blood Versus Bone Marrow. Blood. 2020 Oct 7:blood.2020006219. doi: 10.1182/blood.2020006219. Epub ahead of print. PMID: 33027813.