细胞系fsc-ssc分为两个群

chunfeng

检测MG-63细胞系的凋亡情况。今天发现细胞FSC-SSC图上分为两个群。查看了下上次做的情况，发现上次5Um处理组正常， 20um组虽然没有明显的两个群，但是感觉是有两个群的趋势。请问这是正常的吗？不正常可能的原因是什么呢？两次FSC,SSC电压基本一样。

tiger

chunfeng 发表于 2020-10-26 19:48
你好。我把两个群都选中后分析，发现在坏死的右上象限里细胞也分为了两个群，请问这正常吗？
...

就是这样的，如果你把PI的浓度降下来，就是一群了。再把粘连成细胞去掉，就更准确了

niwanmao

确保细胞状态没问题、处理也没问题的话，得排除仪器液流状态变异，每天的仪器质控有做吗？

chunfeng

前一天厂家刚过来做过保养，仪器应该没问题。

tiger

chunfeng 发表于 2020-10-24 23:27
前一天厂家刚过来做过保养，仪器应该没问题。

前面的那群是凋亡或坏死的细胞。

MUGUANGZHICHENG

chunfeng 发表于 2020-10-24 23:27
前一天厂家刚过来做过保养，仪器应该没问题。

我们仪器刚刚出了这个问题，是BD的，这个很有可能是仪器问题（样本进样压力），你用台盼蓝染色计数，算一下细胞活率，然后在上流式测一下，分别高速中速低速看一下，如果活细胞占总数比例有变化那就是流式细胞仪问题。

chunfeng

MUGUANGZHICHENG 发表于 2020-10-26 14:55
我们仪器刚刚出了这个问题，是BD的，这个很有可能是仪器问题（样本进样压力），你用台盼蓝染色计数，算一 ...

我们也是bd的， BD FACSverse.请问后来你们怎么解决的？

chunfeng

tiger 发表于 2020-10-26 09:55
前面的那群是凋亡或坏死的细胞。

你好。我把两个群都选中后分析，发现在坏死的右上象限里细胞也分为了两个群，请问这正常吗？

chunfeng

tiger 发表于 2020-10-26 21:08
就是这样的，如果你把PI的浓度降下来，就是一群了。再把粘连成细胞去掉，就更准确了
...

谢谢您的答复。请问您说的PI“浓度降下来”是指PI 通道信号太高了吗，还是指PI实际浓度过高了？我用biolegend的试剂盒。说明书是加10UL PI, 是因为细胞少导致PI浓度相对高了？ 如果可以我想请您帮我分析一下我的FCS数据，然和我自己分析的对比一下。不知道可不可以

MUGUANGZHICHENG

chunfeng 发表于 2020-10-26 19:34
我们也是bd的， BD FACSverse.请问后来你们怎么解决的？

首先确保你的样本没有问题，我用台盼蓝计数确定活率，然后样本染死活染料，用细胞调的FSC和SSC。