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[凋亡检测] 细胞系fsc-ssc分为两个群

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发表于 2020-10-23 19:30:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星已解决
检测MG-63细胞系的凋亡情况。今天发现细胞FSC-SSC图上分为两个群。查看了下上次做的情况,发现上次5Um处理组正常, 20um组虽然没有明显的两个群,但是感觉是有两个群的趋势。请问这是正常的吗?不正常可能的原因是什么呢?两次FSC,SSC电压基本一样。

第一次5uM组

第一次5uM组

第一次20uM组

第一次20uM组

第二次5uM组

第二次5uM组

第二次20uM组

第二次20uM组

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就是这样的,如果你把PI的浓度降下来,就是一群了。再把粘连成细胞去掉,就更准确了
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发表于 2020-10-23 19:30:26 | 显示全部楼层
本帖最后由 tiger 于 2020-10-26 21:11 编辑
chunfeng 发表于 2020-10-26 19:48
你好。我把两个群都选中后分析,发现在坏死的右上象限里细胞也分为了两个群,请问这正常吗?
...

就是这样的,如果你把PI的浓度降下来,就是一群了。再把粘连成细胞去掉,就更准确了
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发表于 2020-10-24 22:34:43 | 显示全部楼层
确保细胞状态没问题、处理也没问题的话,得排除仪器液流状态变异,每天的仪器质控有做吗?
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 楼主| 发表于 2020-10-24 23:27:22 来自手机 | 显示全部楼层
前一天厂家刚过来做过保养,仪器应该没问题。
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发表于 2020-10-26 09:55:10 | 显示全部楼层
chunfeng 发表于 2020-10-24 23:27
前一天厂家刚过来做过保养,仪器应该没问题。
前面的那群是凋亡或坏死的细胞。
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发表于 2020-10-26 14:55:36 来自手机 | 显示全部楼层
chunfeng 发表于 2020-10-24 23:27
前一天厂家刚过来做过保养,仪器应该没问题。


我们仪器刚刚出了这个问题,是BD的,这个很有可能是仪器问题(样本进样压力),你用台盼蓝染色计数,算一下细胞活率,然后在上流式测一下,分别高速中速低速看一下,如果活细胞占总数比例有变化那就是流式细胞仪问题。
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 楼主| 发表于 2020-10-26 19:34:37 | 显示全部楼层
MUGUANGZHICHENG 发表于 2020-10-26 14:55
我们仪器刚刚出了这个问题,是BD的,这个很有可能是仪器问题(样本进样压力),你用台盼蓝染色计数,算一 ...

我们也是bd的, BD FACSverse.请问后来你们怎么解决的?
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 楼主| 发表于 2020-10-26 19:48:56 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-10-26 09:55
前面的那群是凋亡或坏死的细胞。

你好。我把两个群都选中后分析,发现在坏死的右上象限里细胞也分为了两个群,请问这正常吗?

结果

结果

圈门

圈门
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 楼主| 发表于 2020-10-26 22:05:46 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-10-26 21:08
就是这样的,如果你把PI的浓度降下来,就是一群了。再把粘连成细胞去掉,就更准确了
...

谢谢您的答复。请问您说的PI“浓度降下来”是指PI 通道信号太高了吗,还是指PI实际浓度过高了?我用biolegend的试剂盒。说明书是加10UL PI, 是因为细胞少导致PI浓度相对高了? 如果可以我想请您帮我分析一下我的FCS数据,然和我自己分析的对比一下。不知道可不可以
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发表于 2020-10-26 22:10:16 来自手机 | 显示全部楼层
本帖最后由 MUGUANGZHICHENG 于 2020-10-26 22:22 编辑
chunfeng 发表于 2020-10-26 19:34
我们也是bd的, BD FACSverse.请问后来你们怎么解决的?

首先确保你的样本没有问题,我用台盼蓝计数确定活率,然后样本染死活染料,用细胞调的FSC和SSC。
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