抗体滴度验证的问题求救

田先生

在线请教，我按照染色指数的方法来做抗体的滴度验证，做一例标本能看得出趋势，但增加标本的例数，发现每个标本做出来的最佳染色指数所对应的最佳滴度都不一样，没有趋势性，我验证的BD CD19 APC，对其做了5个滴度，分别是5/4/3/2/1ul，分析方法是先通过前向/侧向把细胞碎片去掉，再把淋巴细胞单独圈出来，在淋巴细胞下面分别圈CD19+的细胞群体和阴性的淋巴细胞群，分别把CD19+的阳性细胞群、阴性的淋巴细胞群各自的Mean值和阴性的淋巴细胞rSD值show出来，通过染色指数的计算公式分别得出各自的SI值进行比较，但得出的结论都不一样。求各位老师帮忙解答，是我设门方法的问题还是其他因素原因？

骑猪上高速

mean? 算SI好像应该用 geometric mean。

niwanmao

你指的是是如何不一样？

田先生

我用一例标本做的时候可以看出加1ul时SI染色指数是最高的，后面我又加做了四例标本，都分别做的是5个滴度，算出来有的是3ul染色指数最高，有的是5ul染色指数最高，没有一个相对稳定趋势的结果。

蓝色忧郁

骑猪上高速 发表于 2020-10-29 20:58
mean? 算SI好像应该用 geometric mean。

我查阅相关方法，有用平均荧光强度计算的，也有用中位值计算的，还没有看到用几何平均值计算的，有什么区别吗？

山鬼

我也有同样的疑问 求解

骑猪上高速

蓝色忧郁 发表于 2020-10-30 09:18
我查阅相关方法，有用平均荧光强度计算的，也有用中位值计算的，还没有看到用几何平均值计算的，有什么区 ...

理解流式数据中的MFI
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2427-1-1.html
如何计算染色指数之实例解析（Kaluza和FlowJo）
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4548-1-1.html

tiger

田先生 发表于 2020-10-30 09:11
我用一例标本做的时候可以看出加1ul时SI染色指数是最高的，后面我又加做了四例标本，都分别做的是5个滴度， ...

SD比MFI还大，再核对一下数据。

蓝色忧郁

tiger 发表于 2020-10-30 14:34
SD比MFI还大，再核对一下数据。

楼主那个列表取值是rSD

蓝色忧郁

骑猪上高速 发表于 2020-10-30 12:25
理解流式数据中的MFI
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2427-1-1.html
如何计算染色指数之实例解析（K ...

实际工作中，我们的阴性细胞群会落到负轴上导致geo mean计算不出来怎么办？