细胞膜电位测定

暗夜星辰

大家好，想咨询下用DiBAC4(3)对细菌的细胞膜电位进行测定，使用不同浓度的的染料对细胞进行染色建立标准曲线，通过2%的甲醛固定细胞使细胞去极化，使用样品的荧光强度和去极化的荧光强度并通过能斯特方程就可以对样品的膜电位进行绝对定量，但有些文献还用了在样品中加入用不同浓度的钾离子和一定浓度的缬氨霉素来建立校准曲线，不太明白后面钾离子所建立的校准曲线与前面通过染料建立的标准曲线的关系和作用在哪？

niwanmao

这篇文章确实很晦涩难懂。
从文章前言部分看，染料滴定是为了确定最佳浓度，而钾离子梯度是为了形成校准曲线，通过能斯特方程计算线粒体膜电位 ，这是我的理解，供参考。

暗夜星辰

niwanmao 发表于 2020-11-1 21:50
这篇文章确实很晦涩难懂。
从文章前言部分看，染料滴定是为了确定最佳浓度，而钾离子梯度是为了形成校准曲 ...

倪老师，在能斯特方程V =Edy =-RT*ln(Ci/Ce)/ZF中通过细胞内外的染料浓度来计算膜电位，但细胞内染料浓度无法确定，因此通过甲醇固定使细胞去极化使电位为0，Ci=Ce,来改变能斯特方程变为V =Edye= 25.6mV*ln(F0/Fd,0)变成样品的荧光强度与去极化样品的荧光强度之比来计算绝对膜电位，但文后又给出了在不同浓度的钾离子溶液中，通过加入缬氨霉素使细胞内钾离子浓度发生变化，使方程变为Vapp=EKÞ = 25.6mV *ln(Ko/Ki)作为校准，后面这部分可不可以理解为我通过不同浓度的钾离子使膜电位发生变化，从而导致相应的荧光强度发生变化，从而制作出不同浓度的钾离子的荧光强度与膜电位的标准曲线，样品的荧光强度通过该标准曲线即可获得相应的膜电位呢？

niwanmao

暗夜星辰 发表于 2020-11-2 09:30
倪老师，在能斯特方程V =Edy =-RT*ln(Ci/Ce)/ZF中通过细胞内外的染料浓度来计算膜电位，但细胞内染料浓度 ...

是的。

暗夜星辰

好的，谢谢您