补偿有问题吗？如何改进？

陈景飞

实验一和二.pdf (879.44 KB, 下载次数: 19)

2020-11-15 12:59 上传

点击文件名下载附件
实验一和二

实验三.pdf (613.79 KB, 下载次数: 21)

2020-11-15 13:00 上传

点击文件名下载附件
实验三

倪老师及各位老师：
本人是流式新手，最近做了三次流式实验。总感觉有很多问题。
我先简单的说一下我的实验，我做的是组织细胞，制备这个组织细胞总是会有很多debris。
做补偿live/dead和unstained用的是本身这个组织的细胞，其他我用的是beads。
附件我附上了我做补偿的图，设置的电压，以及实验结果的画门。
想请各位老师看看有什么问题：
1）三个实验补偿从gating的图来看是有问题的，但是我感觉我在调补偿时候，没有什么问题，不知道该如何改进？
2）实验一结果plot中出现一些“划痕”是什么原因？
3）实验三为什么logic view时候细胞都挤压在一起，而改为log view时许多细胞又在坐标轴之外了。这种情况该怎么办？

非常感谢大家的帮助！

niwanmao

你这里最大的问题是碎片太多了。
其实可以通过阈值设置，将碎片排除掉。

而补偿，并不是你这里的问题。
首先，你将CD3、CD4、CD8的电压调高。
其次，你所说的第3个问题里面，Log的缺点就是负值会被切掉，所以后来才发明出Logicle，因此，坐标就用Logicle，不要纠结。
最后，你看到的低值部分出现条纹，那是数据计算显示的问题，用Logicle显示，并且调节Logicle的参数可消除：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1850-1-1.html；https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7370-1-1.html

陈景飞

niwanmao 发表于 2020-11-15 22:11
你这里最大的问题是碎片太多了。
其实可以通过阈值设置，将碎片排除掉。

倪老师：
1. 如何设置阈值去除碎片？有没有一个好的教程链接？
2. Cd3,CD4, CD8电压已经很高了，再调高可以吗，不会增加背景吗？另外我想知道倪老师是如何判断电压需要调高的？
谢谢倪老师

niwanmao

陈景飞 发表于 2020-11-15 23:38
倪老师：
1. 如何设置阈值去除碎片？有没有一个好的教程链接？
2. Cd3,CD4, CD8电压已经很高了，再调高可 ...

设置阈值，很简单，参考你们机器的操作手册。
至于电压，我只是推测，目前看不到你这个实验的其它任何信息。