为什么我的活细胞数量真么少……

toby3003 · 发表于 2011-4-18 22:21:26

1细胞凋亡实验，fitc pi染色，一图试剂包括双阴，两个单阳。
2在细胞收集阶段，怎样圈门？是全都圈上么？
结果一直不理想很郁闷，谢谢

兔子赵 · 发表于 2011-4-19 08:37:12

你对照就没做好
把对照细胞调在左下象限不然你的结果都是无意义的

niwanmao · 发表于 2011-4-19 08:46:33

toby3003 发表于 2011-4-18 22:21

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1细胞凋亡实验，fitc pi染色，一图试剂包括双阴，两个单阳。
2在细胞收集阶段，怎样圈门？是全都圈上么？
...

看你这几个图，的确是没有AV-PI双阴性的活细胞，需要考虑以下因素：
1、你检测的是否贴壁细胞？如是，那么可能在消化上需要注意一下。
2、电压调节是否正确？是否因为过大，而导致正常的细胞都跑到外面去了？
3、AV-PI的染色步骤有没有问题？

另外，收集的时候不要圈门，要尽可能收集所有的细胞。

toby3003 · 发表于 2011-4-19 11:05:58

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可能是您说的这个原因，因为我的细胞特别多（睾丸间质细胞）在消化的时候我想都给硝化下来，吹打的很大。电压是中心实验室老师调的……这个很郁闷
在收集细胞的时候如果不圈门机器不让收集吧……

stef1981 · 发表于 2011-4-19 11:34:41

最左边的都是凋亡细胞或细胞碎片，似乎应该选最右边的、稍微大一点的正常细胞才对

niwanmao · 发表于 2011-4-19 13:25:21

toby3003 发表于 2011-4-19 11:05

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可能是您说的这个原因，因为我的细胞特别多（睾丸间质细胞）在消化的时候我想都给硝 ...

那么估计是你处理的时候细胞都被你吹打破了。这类细胞特别脆弱，建议操作时手法轻柔一点。
收集的时候不圈门是可以收集的，这个你不需要担心。

toby3003 · 发表于 2011-4-20 10:09:26

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如果不圈门，不让我做荧光图呀……

niwanmao · 发表于 2011-4-20 10:53:29

toby3003 发表于 2011-4-20 10:09

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如果不圈门，不让我做荧光图呀……

是什么机器？

肯定不会这样的。否则如果我不知道这类细胞的特性，我肯定要把全部细胞都取进去之后，再进行选择；如果一定要设门的话不就没法设了？

toby3003 · 发表于 2011-4-20 19:59:19

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感谢楼主，细心的回复！
我用的是DB临床型，机器不是我操作的……实验室的老师说不能我也没有办法，都是刚接触这个，因为不能不圈门操作，所以就圈了一个很大的门，力求收集更多的细胞……

niwanmao · 发表于 2011-4-20 20:08:31

toby3003 发表于 2011-4-20 19:59

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感谢楼主，细心的回复！

哦，是BD FACS Calibur吧。
我估计你们实验室的老师可能是想知道你要获取何种目标细胞，这样直接把碎片什么的排除掉，就比较干净吧。这倒是没关系，但是细胞的状态一定要保证，所以你下次消化的时候注意动作轻柔一点，宁可细胞少一点，也不要因为用力过度，造成细胞机械性损伤太厉害。
实在不行，做细胞周期，分析凋亡峰也行啊，毕竟贴壁细胞做AV-PI双标的确比较困难的。

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