查看: 62|回复: 4
收起左侧

[细胞周期] 做细胞周期的固定问题

[复制链接]
 楼主| 发表于 2020-11-18 11:24:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请教各位,最近做的一种海藻的细胞周期测定,这个藻没有细胞壁,细胞固定方法如下:取一定量的藻液离心收集藻细胞,然后PBS洗涤,然后重悬藻细胞成藻液,将藻液逐滴加入到冷乙醇中,放到-20℃冰箱中保存,隔天上仪器测。
问题如下:感觉这个乙醇固定细胞之前的处理时间是不是太长(大概需要1.5小时),我是想看每个取样时间的变化(就是每隔几个小时它细胞周期的变化),所以我想请教一下有没有比较快的固定方法,谢谢。

发表于 2020-11-18 20:17:41 | 显示全部楼层
固定前的操作为什么需要1.5小时?是否能缩短?
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48小时才能生效。
 楼主| 发表于 2020-11-19 10:38:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-11-18 20:17
固定前的操作为什么需要1.5小时?是否能缩短?
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48 ...

嗯 是的老师, 固定前 我要离心然后去上清然后收集细胞,在用PBS洗一下,转移到小的离心管里,再离心去掉PBS ,然后再剩余一点PBS涡旋成悬液加到冷乙醇中,到加到乙醇之前的这一步操作时间大概就得一小时,因为每次要处理九个样品,所以时间可能缩短不了了。
所以我在想有没有方法,在取样时,离心之前就把它给固定了。
 楼主| 发表于 2020-11-19 10:50:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-11-18 20:17
固定前的操作为什么需要1.5小时?是否能缩短?
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48 ...

我问了一个老师,他建议我用多聚甲醛固定,就在取样时直接加到藻液,这样就达到及时固定的目的了。不知道这种方法是不是可行
发表于 2020-11-19 12:34:33 | 显示全部楼层
ljw2020 发表于 2020-11-19 10:50
我问了一个老师,他建议我用多聚甲醛固定,就在取样时直接加到藻液,这样就达到及时固定的目的了。不知道 ...

藻类我不知道步骤上是否有区别,但至少在我们做动物样本的时候,不建议用多聚甲醛的,因为多聚甲醛主要固定的是蛋白,核酸反而容易漏出去。
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2020-12-2 11:45

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.