PBMC染单核细胞的CD14染不上

超级布丁

请教各位老师，我用PBMC体外培养2天后上机，CD14一直是阴性的，换了两种抗体还是染不上，但是CD16分群就很好。真是太着急了，麻烦老师们帮忙看一下。这是PBMC的FS/SS图。

这是PBMC的图

BVS510染死活，圈出来活细胞

BVS510染死活

FITC是CD45，圈出单核细胞。

PE/CY7是CD16

PE/CY7是CD16

APC是CD14

APC是CD14，完全没有阳性的
谢谢各位了

超级布丁

FITC是CD45

另外如果直接以FITC-CD45和SSA看，分了三群，group1是单核细胞群，group3是淋巴细胞，group2是什么细胞啊？

niwanmao

超级布丁 发表于 2020-11-26 21:09
另外如果直接以FITC-CD45和SSA看，分了三群，group1是单核细胞群，group3是淋巴细胞，group2是什么细胞啊 ...

2是中性粒细胞

niwanmao

你是否需要先用淋巴细胞CD3、CD19等标记，确认一下这些是不是淋巴？

超级布丁

niwanmao 发表于 2020-11-27 20:44
2是中性粒细胞

老师，请问PBMC会有这么多中性粒吗？

超级布丁

感谢老师回复，重新染了单标管，发现可能是之前FS/SS电压设置的太大了，导致巨噬细胞飘出去了。重新设置电压，圈门后CD14+果真高了很多。

niwanmao

超级布丁 发表于 2020-11-27 22:05
感谢老师回复，重新染了单标管，发现可能是之前FS/SS电压设置的太大了，导致巨噬细胞飘出去了。重新设置电 ...

是的，一般抗体出问题的可能性很小，大多是条件的问题。

tiger

超级布丁 发表于 2020-11-27 22:05
感谢老师回复，重新染了单标管，发现可能是之前FS/SS电压设置的太大了，导致巨噬细胞飘出去了。重新设置电 ...

收细胞时消化了吗？

超级布丁

tiger 发表于 2020-11-30 09:10
收细胞时消化了吗？

嗯嗯，之前没消化暴力刮下来，发现不太行