为什么用流式测ROS,对照组ROS平均荧光强度很高？

hjkn

老师您好，我用碧云天ROS试剂盒，DCFH-DA予1:1000稀释，孵育20min，6孔板铺板我试过4*10的5次方和10的6次方细胞，结果都一样，对照组ROS值高，如附件图，绿色是空白组（不加染料不加刺激），红色是我的对照组（加染料不加刺激），蓝色，橙色是加药组，请问老师，为什么我的对照组ROS平均荧光强度这么高？使得跟加药组差距拉不开，非常不解，看过别人做的ROS,对照组荧光强度并没有这么高，望老师抽空回答一下，十分谢谢

niwanmao

不知道上级门图形如何，如果FSC/SSC分群位置比较稳定，可能结果还是可信的，只要有差异即可，不同的人用不同的细胞，结果是可能不同的。

可以多重复几次。

hjkn

niwanmao 发表于 2020-12-13 21:54
不知道上级门图形如何，如果FSC/SSC分群位置比较稳定，可能结果还是可信的，只要有差异即可，不同的人用不 ...

倪教授您好，我上传了对应的流式圈门图，还麻烦您抽空帮我看看有问题么，非常感谢倪教授

niwanmao

hjkn 发表于 2020-12-14 00:44
倪教授您好，我上传了对应的流式圈门图，还麻烦您抽空帮我看看有问题么，非常感谢倪教授
...

FSC/SSC的分布还是不错的。
结果应该是可信的。
但感觉你这里的电压都偏高，右限都跑外面去了，建议不要用空白作为电压参照，而是以黄色或蓝色的左侧小峰作为阴性峰，往左调，使得阳性峰右限回到坐标范围内。
之后的统计，可以拿阳性峰的MFI，做统计。

hjkn

niwanmao 发表于 2020-12-14 08:58
FSC/SSC的分布还是不错的。
结果应该是可信的。
但感觉你这里的电压都偏高，右限都跑外面去了，建议不要 ...

好的，谢谢倪教授，非常感谢

wmj123456

niwanmao 发表于 2020-12-14 08:58
FSC/SSC的分布还是不错的。
结果应该是可信的。
但感觉你这里的电压都偏高，右限都跑外面去了，建议不要 ...

倪老师，做ROS实验，药物处理后，通过FSC和SSC流式图，看到有凋亡的细胞存在，那么在圈主细胞的时候，这群凋亡的细胞需要圈住吗？我感觉凋亡的细胞是不也会分泌活性氧呢？他俩之间应该是有正向关系的，我看很多都是没有圈住这群凋亡的细胞的