THP-1诱导极化巨噬细胞

wmj123456 · 发表于 2020-12-19 21:18:22

各位老师好，用THP-1诱导极化成M1和M2，结果发现加PMA之后，一半的细胞都没有贴壁，而用CD68/CD86/CD163检测M1和M2的时候，均没有阳性比例。能帮忙分析下是什么原因吗？正常情况下，诱导成M0，贴壁的比例是多少呢？

niwanmao · 发表于 2020-12-20 09:57:37

先跟经典文献对照一下看看你的实验条件是否正确？
链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4545815/
实验条件简述：

THP-1与150 nM PMA 孵育24小时，然后在RPMI培养基中孵育24小时，将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞M0。
用20 ng/ml IFN-γ 和10pg/ml LPS 孵育，诱导M0极化为M1。
用20 ng/ml的IL-4和20 ng/ml的IL-13共孵育，诱导M0极化为M2。

wmj123456 · 发表于 2020-12-21 17:53:27

本帖最后由 wmj123456 于 2020-12-21 17:56 编辑

倪老师，您好，我的诱导和极化方法跟您上面写的在用量方面有点差别，但是是根据一篇中文文献的方法，他们是做出来的了。加完PMA之后，有细胞是悬浮的，没有贴壁，我发了2张图，分别是全部收集的，和只收集贴壁细胞的，结果如下。理论上，加PMA之后，大部分细胞都是贴壁了吧？我的这种情况，是否说明在M0这一步就出问题了？

niwanmao · 发表于 2020-12-22 15:23:31

wmj123456 发表于 2020-12-21 17:53
倪老师，您好，我的诱导和极化方法跟您上面写的在用量方面有点差别，但是是根据一篇中文文献的方法，他们是 ...

参考我前面给的那篇文献做一下调整看看。

wmj123456 · 发表于 2020-12-22 18:28:53

本帖最后由 wmj123456 于 2020-12-22 18:43 编辑

niwanmao 发表于 2020-12-22 15:23
参考我前面给的那篇文献做一下调整看看。

好的，谢谢倪老师。刚看到您们发表的一篇关于THP-1诱导极化的文章，真是太暖心啦。不过有个问题还没明白，用PMA刺激成M0的时候，大部分的细胞都是贴壁了吧？至少也是90%的都会贴壁吧？

任小琪 · 发表于 2021-4-30 11:45:05

wmj123456 发表于 2020-12-22 18:28
好的，谢谢倪老师。刚看到您们发表的一篇关于THP-1诱导极化的文章，真是太暖心啦。不过有个问题还没明白， ...

你好，我也在用PMA使thp-1诱导M0,是会有90%贴壁的哈。

lxk47640 · 发表于 2021-5-31 10:14:49

有个小问题想问问大家，未刺激悬浮的THP-1有没有什么表面标志？（用单核的CD14好像不行吧？）。因为我需要把它当做和其他细胞共培养的对照，不能刺激。有没有有经验的同志分享一下？

niwanmao · 发表于 2021-5-31 15:03:53

lxk47640 发表于 2021-5-31 10:14
有个小问题想问问大家，未刺激悬浮的THP-1有没有什么表面标志？（用单核的CD14好像不行吧？）。因为我需要 ...

主要是CD14和CD32，见附件：

inline-supplementary-material-2.pdf (190.2 KB, 下载次数: 59)

来源：https://openres.ersjournals.com/content/3/1/00026-2016

lxk47640 · 发表于 2021-6-2 16:15:31

niwanmao 发表于 2021-5-31 15:03
主要是CD14和CD32，见附件：

来源：https://openres.ersjournals.com/content/3/1/00026-2016

收到，感谢

lxk47640 · 发表于 2021-6-2 16:17:24

另外，正常培养的Jurkat细胞CD3表达情况怎样？是否有B细胞的肿瘤细胞系推荐？能表达CD19 CD20之类的

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