本帖最后由 MXM 于 2020-12-24 22:57 编辑
我用的是FLOWJO V10，最近需要做流式，先弄了个简单的单染，数据处理的时候发现阳性群体分群并不明显。使用的抗体是鱼类中CD3分子（间标）表达的原核蛋白进行制备的单抗，使用空白对照以及同型IgG2b抗体，PI染死细胞（上机前5min染色），想请教各位老师，帮忙看一下是否是处理数据的时候哪里不对，还是抗体本身的问题。
使用的仪器是BD C6 Plus，因为后面想进行细胞分选（CD3,CD4-1,CD4-2）各个抗体会进行一个荧光标记（分选时使用另外的分选流式仪），但听说PI染料如果占了FL2通道后，那3通道使用的荧光染料会重叠很大，不知道各位老师能否帮忙推荐一下CD3,CD4-1,CD4-2分别标记什么荧光素比较好？
因为对流式是刚接触，问题比较基础，想让各位老师
1、看看我圈门顺序以及划门区域是否可行？
2、FITC阳性分群不明显的是有原因？抗体稀释比例1:1000，二抗用AF488,1:1000（放4°，不冻融）
3、分群不明显的情况下可以如何调整试验方案？
4、这数据可用吗？如果可以，阳性划门怎样圈出更好？
5、能否帮推荐一下分选时荧光搭配？（CD3,CD4-1,CD4-2）+PI去死活
6、阴性（同型对照）加不加PI对数据处理有什么影响吗？
淋巴细胞圈门
去黏连
去死细胞
阳性分群
阳性
空白对照
复CD3e-9-BL-BU.zip
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发表于 2020-12-24 22:35:53
有大神在嘛