【流式分选技术请教】间标抗体用于流式分选

追追吧啦

想请教大家一下，我想用流式分选小鼠心脏组织细胞后进行后续实验，不需要培养。我的目标细胞一共有两个表面标记，一个是大鼠源的APC的直标抗体；另一个因为不是常见标记，只能购买到兔多抗的一抗。我想请教：① 如果一个抗体是小鼠直标抗体，另一个是兔多抗，该以什么样的顺序染色？可否一抗与直标抗体同时染，然后进行羊抗兔的二抗染色。②染色前是否需要封闭，如果封闭是否会影响直标抗体的结合？
还有一个关于流式分选的问题，如果我的细胞样本用磁珠进行一次富集，可以将目标细胞的得率从10%提高到20%，是否有必要先磁珠富集一下再进行后续染色？（因为我的磁珠不是直标，是采用biotin间标的方式，我担心如果先磁珠富集需要多次洗涤细胞，会损伤损失细胞。）

非常感谢！！

niwanmao

间标和直标一起用，一般建议先染间标的一抗、二抗，充分洗涤后，再染直标的抗体。

一般分群如果良好，封闭不是必须的。但如果分群不好的话，分选效果也不会好。

至于事先富集，没有必要。10％的比例，对流式分选很轻松，即使是稀有细胞的分选，也不是问题。

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niwanmao 发表于 2021-1-27 23:47
间标和直标一起用，一般建议先染间标的一抗、二抗，充分洗涤后，再染直标的抗体。

一般分群如果良好，封闭 ...

明白了，非常感谢倪老师