用磁珠分选法从PBMCs中成功分选出NK细胞，且纯度达到97%

Lydia

面对一个未曾做过的实验项目——磁珠分选，我一开始读英文说明书都是小心翼翼的。后面经过反复尝试和练习后，终于掌握NK细胞磁珠分选技术，分选纯度从一开始的69.3%提高到了97.4%。
现在将相关说明书和实验中的注意事项记录并分享一下。
我买的是NK细胞阴选试剂盒。
实验前要根据自己每次操作的样本量，估算好自己将要操作的细胞总量，买好对应的分离柱（有大，中，小之分）。
1.磁珠分选过程尽量在冰上操作，过柱子后也在冰上收集细胞，我的指导老师说这样可以降低细胞死亡率和非特异染色。
2.可以适当延长磁珠孵育时间，比如45mins或1h。
3.孵育过程中，稍微轻弹，使磁珠充分结合，不要用力弹。
4.为避免分离柱频繁发生堵塞情况，将磁珠孵育好之后的混合物用磁珠分选Buffer稀释至更大体积（10倍都可以）。
5.收集到的细胞要反复过柱子，增加分选纯度，必要时最后一次用一个新的分离柱。


  

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niwanmao

感谢分享，加分鼓励 。

这个试剂盒，一个TEST的成本大概多少钱？

Lydia

niwanmao 发表于 2021-2-2 20:51
感谢分享，加分鼓励 。

这个试剂盒，一个TEST的成本大概多少钱？

NK阴选试剂盒折后是7480元，里面只有两个试剂。一个是1 mL的 NK Cell Biotin-Antibody Cocktail,另一个是2 mL的 NK Cell MicroBead Cocktail, human。
至于每次的成本的话，根据自己每次实验用量，如果细胞总量大的话，用的试剂量也大。
实验成本还包括那个磁力架，磁力架很贵要一两万。我用的这种最小容量的吸附柱，一个要200块钱。

niwanmao

Lydia 发表于 2021-2-2 23:25
NK阴选试剂盒折后是7480元，里面只有两个试剂。一个是1 mL的 NK Cell Biotin-Antibody Cocktail,另一个 ...

哦。
吸附柱可以重复用的吧？
另外，按照你的用法，毛估估这个试剂盒用了几次？

Lydia

niwanmao 发表于 2021-2-3 09:19
哦。
吸附柱可以重复用的吧？
另外，按照你的用法，毛估估这个试剂盒用了几次？ ...

吸附柱厂商说不建议重复使用，我之前也想过重复使用（想使用完后清洗干净并且高压一下下次用）。但是吸附柱里面很容易生锈，而且反复使用就不能保证完全洁净了。所以我没有重复使用过。
我试过堵了的柱子想清洗干净，然后在一次实验中继续用，最后还是不行，因为再通不了，可能我再通的方法不对。
我这个试剂盒以我每次的用量，能用十六七次。因为我每次是从30ml外周血里提取PBMCs,对应大约是3-6*10的7次方的PBMCs, 每次试剂用量是说明书里对应的6倍（说明书的剂量对应的是1*10的7次方个PBMC的总量）。

niwanmao

Lydia 发表于 2021-2-3 13:36
吸附柱厂商说不建议重复使用，我之前也想过重复使用（想使用完后清洗干净并且高压一下下次用）。但是吸附 ...

十分感谢你如此详细的回复

Lydia

niwanmao 发表于 2021-2-3 14:12
十分感谢你如此详细的回复

感谢您提供这么好的平台，辛苦您这么多年的工作。

clz281

特别感谢楼主的分享！我这边最近也在找这方面的产品，也找过这家供应商，对方给我配置的是CD56 MicroBesds，human磁珠。这种方式也是需要先密度梯度离心分离出PBMC。

clz281

老师，Miltenyi的产品货期一般都比较长，您这款产品的有效期是多久的？

btx362237729

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