如何设门分析小鼠的B细胞亚群和T细胞亚群及其活化

niwanmao

这是一个19参数的18色流式方案，经过设计和优化，能够对小鼠淋巴组织中不同的T细胞和B细胞亚群进行全面和同步的免疫表型鉴定。
使用该方案识别的细胞群包括4个主要的B细胞亚群(记忆、活化、浆细胞和浆母细胞)和7个主要的CD4+T细胞亚群(初始、中央记忆、效应记忆、辅助细胞、调节T细胞、滤泡辅助细胞和滤泡调节细胞)。


下图是对出生21天的新生BALB/c小鼠的新鲜分离的脾细胞染色结果，大家主要是要学习一下其设门步骤，不一定要做18色，主要是选择关键的设门标记，和关键的设门方式。

去碎片、去粘连体、圈活细胞，通过TCRβ和CD4/CD19，圈出TCRβ+CD4+的辅助T、TCRβ-CD19+的B细胞、TCRβ-CD19-部分（含浆细胞）。


对TCRβ-CD19-进一步分析synd-1和IgM，圈出synd-1+ IgM+ I-A/I-E- 的浆细胞：



对TCRβ-CD19+的B细胞，分析synd-1+ IgM+ I-A/I-E +的浆母细胞，对synd1-部分，进一步如下图逐级分析活化B、记忆B：



对TCRβ+CD4+的辅助T细胞：
- 通过CD44和CD62L，分析TEM、TCM、Naive T；
- 通过CD25/foxP3分析Treg和效应T细胞；
- 通过CXCR5、ICOS、PD-1分析三阳性的Tfh
- 对Tfh进一步分析，圈出其中CD25和foxP3双阳的Tfr。


Kyle T. Mincham, et al. High-Dimensional Immunophenotyping of Murine T-cell and B-cell Subsets. bioRxiv 2020.05.07.082214; doi: https://doi.org/10.1101/2020.05.07.082214

xiaoflow

感谢分享。
我很好奇作者为何使用TCRβ+而非CD3？在我所看到的文献中，CD3更加常见。思考了一下可能有以下原因：1.分选时使用TCRβ+，后续如果需要进行刺激仍可以使用CD3抗体；2.抗体种类和对应荧光染料的限制。
不知是我看的文献太局限了，还是有专门的原因呢。

niwanmao

xiaoflow 发表于 2021-2-28 15:51
感谢分享。
我很好奇作者为何使用TCRβ+而非CD3？在我所看到的文献中，CD3更加常见。思考了一下可能有以下 ...

更主要的其实是，这里分析的这几类，都是非γδT，所以直接用TCRβ，免去CD3搭配TCRγδ排除γδT的麻烦，反而节省一个通道。

xiaoflow

niwanmao 发表于 2021-2-28 19:46
更主要的其实是，这里分析的这几类，都是非γδT，所以直接用TCRβ，免去CD3搭配TCRγδ排除γδT的麻烦 ...

学习了，谢谢您

毛豆24821

CD44-CD62L-是什么细胞群？

niwanmao

毛豆24821 发表于 2021-8-3 14:44
CD44-CD62L-是什么细胞群？

TE

毛豆24821

这一篇的浆细胞是CD19- IgM+，好像跟别的反的。

niwanmao

毛豆24821 发表于 2023-11-28 17:50
这一篇的浆细胞是CD19- IgM+，好像跟别的反的。

CD19- PC，是Long lived Plasma cells