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[淋巴细胞相关] 小鼠MC38皮下瘤免疫微环境中CD4/CD8比例异常

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发表于 2021-3-9 15:02:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星已解决
我做了3批小鼠,3批小鼠基本上都是CD8比例极高,有时候CD4还没有,最近做的小鼠流式分析CD8高达70%,查了很多资料,小鼠MC38皮下瘤基本是CD8:CD4是1:1.1左右,流式的老师说我的处理没有问题(详细的处理步骤见我分享的那篇protocol),可能是我这个组织就是这样的,但是我觉得自己做出来的结果和文献都不一样,数据可能有问题,所以想问下大家是否也有这样的结果?我目前看的文献,确实没有我这种CD8细胞比CD4细胞高这么多的

T细胞圈门

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不是换CD3抗体,是降低死活染料用量或调低电压,使荧光信号可见。
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发表于 2021-3-9 15:02:38 | 显示全部楼层
本帖最后由 tiger 于 2021-3-11 09:39 编辑
Reyna 发表于 2021-3-10 17:33
那老师,这个该怎么调整呢?是需要换死活燃料还是说CD3抗体

不是换CD3抗体,是降低死活染料用量或调低电压,使荧光信号可见。
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发表于 2021-3-9 19:47:18 | 显示全部楼层
看这里最下面的CD3门那里,感觉是不是CD3和CD4的补偿有点调的太过了,导致部分CD4+T掉到CD3阴性区域?从而最后导致CD4+T显著减少了。
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发表于 2021-3-10 11:40:50 | 显示全部楼层
把数据传上来,看看
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 楼主| 发表于 2021-3-10 13:31:13 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2021-3-10 11:40
把数据传上来,看看

老师,请问是什么数据呢?是FCS那个文件么?
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 楼主| 发表于 2021-3-10 13:44:24 | 显示全部楼层
@niwanmao 倪老师,我反圈门回去看,发现CD3的圈门没问题,CD4还是在CD3阳性的淋巴细胞那里

CD4圈门.pdf

418.35 KB, 下载次数: 12

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发表于 2021-3-10 14:01:15 | 显示全部楼层
Reyna 发表于 2021-3-10 13:31
老师,请问是什么数据呢?是FCS那个文件么?

是的,就是FCS文件
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 楼主| 发表于 2021-3-10 14:08:21 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-9 19:47
看这里最下面的CD3门那里,感觉是不是CD3和CD4的补偿有点调的太过了,导致部分CD4+T掉到CD3阴性区域?从而 ...

倪老师,我的CD3、CD4、CD8的配色是Alexa Fluor® 700 、FITC、APC,是不是因为荧光的相互干扰导致分型不准确?
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发表于 2021-3-10 15:11:47 | 显示全部楼层
Reyna 发表于 2021-3-10 14:08
倪老师,我的CD3、CD4、CD8的配色是Alexa Fluor® 700 、FITC、APC,是不是因为荧光的相互干扰导致分型不 ...

A700和APC是有补偿的,从你最后这两个图看,CD3本身就弱,再加上CD4有部分是CD3更弱,所以导致圈的CD4偏少,而CD8你可以再反设门看看在哪里。

2021-03-10_15-07-43.jpg
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 楼主| 发表于 2021-3-10 15:16:36 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-10 15:11
A700和APC是有补偿的,从你最后这两个图看,CD3本身就弱,再加上CD4有部分是CD3更弱,所以导致圈的CD4偏少 ...

好的,谢谢倪老师
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