关于同型对照的选择

qinyalu115

倪老师你好：
  我想问一下 如果间接标记法测细胞内抗原 同型对照应该选择 和一抗来源相似的还是和二抗？
  我们实验室的老师说是二抗 ，因为二抗才标记荧光  我想或许是一抗   

到底该怎么选 谢谢

niwanmao

qinyalu115 发表于 2011-5-11 02:27

                               
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1  如果一抗的同型对照不好买怎么办 二抗的同型对照倒是有 能不能将就啊

间接法你可能没理解透，一抗一般都是选择其它种属的，二抗是针对一抗的，但最好也是选其它种属的，举个例子，比如我检测人细胞内的foxP3，那么一抗就选择Mouse anti-human foxP3(IgG1来源），二抗就最好选择Rabbit anti-mouse IgG1 PE，这样选择，你说的第2点里面的第2个可能性不存在，因为RABBIT anti-mouse的二抗根本不可能跟人细胞上的位点结合。而第2点的第1个可能性就是需要通过一抗的同型对照扣除（Mouse anti-human IgG1）。所以这就是我说的为什么同型对照要选择一抗的，而不是二抗的。
我在实际中当然也是这么选择的。

stef1981

应该是二抗吧

niwanmao

qinyalu115 发表于 2011-5-9 23:19

                               
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倪老师你好：
  我想问一下 如果间接标记法测细胞内抗原 同型对照应该选择 和一抗来源相似的还是和二抗？
  ...

我认为应该是要买一抗来源相似的同型对照。因为同型对照的本意就是为了扣除那些非特异性结合的信号，而在间标法中，只有一抗才是特异性结合的，二抗本来就不具有特异性，是为了给一抗“增加”点荧光而已。
所以，从扣除非特异性信号的角度看，我认为需要选择与一抗来源相似的同型对照。

qinyalu115

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1  如果一抗的同型对照不好买怎么办 二抗的同型对照倒是有 能不能将就啊

2  我们理想的结果是 一抗和被检测抗原特异性结合后二抗结合一抗 则被检测的荧光强度和抗原的量呈相关性，还有两种情况，

首先 一抗非特异形结合到细胞（未与被检测抗原发生结合），二抗结合一抗后 流式检测

其次 二抗直接非特异形结合到细胞后流式检测

如果这么说的话 做间接法测抗原 必须买一抗的同型和二抗的同型啊？

3  倪老师， 如果您用间接法测细胞内抗原 选择同型对照 实际是怎么选的呢 谢谢

一成天

同意倪老师的观点。
同型对照的主要目的就是为了排除非特异性吸附，
而这种非特异吸附在鼠抗人来源的一抗应该比兔抗鼠来源的二抗来的更强点，
所以，选择一抗的同型对照比较稳妥点。
   但是个人弱弱的观点：
   二抗虽然是兔针对于鼠的，但是既然是非特异吸附，那么不同种属之间反应似乎都可能存在，这样的话二抗和标本细胞之间应也存在非特异现象。所以，正如楼主所言，一抗和二抗均用同型对照，可能是万全之策了罢。
但，如不能两种同型同时都有，按倪老师的说法选一抗的对照应属上策了罢。

qinyalu115

也就是说 间接法测抗原，如果我的一抗是 羊抗人-Ag的单抗，二抗是驴抗羊-FITC  

那我的同型对照就该选择 FITC-羊抗人-Ag（标记在不同亚基的）

能这么理解么？谢谢

niwanmao

qinyalu115 发表于 2011-5-13 00:20

                               
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也就是说 间接法测抗原，如果我的一抗是 羊抗人-Ag的单抗，二抗是驴抗羊-FITC  

那我的同型对照就该选择 F ...

是，比如一抗来源是羊IgG1，那么同型对照也应该选择羊IgG1来源的。

Noddy

niwanmao 发表于 2011-5-13 08:16
是，比如一抗来源是羊IgG1，那么同型对照也应该选择羊IgG1来源的。

老师您好，那这个同型对照组的加法是用样本+羊IgG1来源抗体+驴抗羊-FITC么？

niwanmao

Noddy 发表于 2017-3-13 09:01
老师您好，那这个同型对照组的加法是用样本+羊IgG1来源抗体+驴抗羊-FITC么？ ...

是的。