fitc单染有问题吗？该怎么画十字门？压边多的图能用吗？

danny1982

                               
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流式新手请教，问题太多了。如图，分别是pi单染，fitc单染，control，和三个给药的图。感觉fitc单染不是应该在Q3吗，几乎都往右上冲，不知道是不是有问题呢，而且这个门不知道该怎么画了。还有正常组显示有37%的压边，调了补偿也没什么改善，压边这么多的图能用吗。自己根据细胞分群画了个门，但Q3显示有8.18%早调，看图明显没那么多啊。还请老师们指教。

niwanmao

压轴的信号是可以调出来的，坐标轴选择Logicle转换。

但是补偿是个关键的问题，哪几个是单染的，你得把补偿调大，使其单阳性，一般都调得下来，实在调不下来，只能根据单染的斜向设多边形门。

zhji1231150260

同样有这个疑问，FITC单染向右上冲，怎么调补偿都调不下来，和楼主的图特别像，这是什么原因？染料的问题？还是什么原因

niwanmao

zhji1231150260 发表于 2021-4-15 17:00
同样有这个疑问，FITC单染向右上冲，怎么调补偿都调不下来，和楼主的图特别像，这是什么原因？染料的问题？ ...

1、抗体滴度。
2、电压。

wxd

细胞凋亡的上机一般步骤是这样的：
1. 上空白对照管（没有进行任何染色）；调整FSC和SSC电压，使细胞和细胞碎片可以明显分开，并且没有压线细胞；调整FITC、PE以及PerCP通道（或者PerCP-Cy5.5）电压，使完整细胞在这些轴上对应位置均在1000以下。
2. 上FITC单阳对照管（只染色FITC），调整FITC电压，使FITC通道没有压线细胞，并且FITC通道上阴性和阳性明显分开；调整PE对FITC补偿、PerCP对FITC通道补偿，使阴阳两群细胞在PE及PerCP通道的平均荧光强度接近，如果补偿特别大，尝试降低PE及PerCP通道电压，再调补偿，直到达到横平竖直的效果。
3. 上PI单阳管，验证PE或者PerCP通道电压是否合适（在这两个通道有两群分群明显的细胞即为合适）如果不合适，重复第二步。之所以选择PerCP通道是因为PI的荧光光谱很宽，PerCP通道也可以检测到荧光信号，且最终分析结果与PE通道结果无差异。并且在诸如C6 Plus等不能调整电压的流式细胞仪上，更容易通过调整补偿得到好看的图片。

PI荧光与PE及PerCP通道对应滤光片如图所示，图片中585/42是常用的PE通道。

zhji1231150260

niwanmao 发表于 2021-4-17 09:18
1、抗体滴度。
2、电压。

倪老师，是不是可以降低PE通道的电压，或者降低一下抗体的浓度

niwanmao

zhji1231150260 发表于 2021-4-26 10:35
倪老师，是不是可以降低PE通道的电压，或者降低一下抗体的浓度

不是说不可以。但是不能乱调。
电压，一般是根据校准微球确定，最后实际样本，尽量不调，必要时进行微调。
抗体用量，需通过滴定确定。