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[磁珠分选] 磁珠分选的CD4+CD25+CD127low细胞体外扩增

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发表于 2021-4-9 11:08:29 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
由于实验需要,需要扩增大量nTreg细胞,用StemCell的磁珠分选试剂盒分选CD4+CD25+CD127low细胞后,体外进行扩增,扩增之后Foxp3表达很低,只有30%左右,扩增条件:细胞和beads比例为1:4,IL-2为100 IU,Rapamycin 100 nM, 刺激八天后,去掉磁珠rest 4天,然后再刺激,总共三轮共扩增36天,细胞数量是多了,但Foxp3表达不高,请问怎么样才能提高Foxp3的表达量?谢谢。

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发表于 2021-4-9 13:51:53 | 显示全部楼层
我没实际操作过,根据检索到的资料,美天旎的技术手册上,是提到由于在这类扩增条件下,常规T增殖高于Treg,所以导致最后foxP3+Treg比例不高。 要知道,之前分选出的CD4+CD25+CD127low本来就包含了一些常规T。

美天旎也提到了他们专门的扩增培养基,应该是他们专门设计的,可考虑用他们的看看。
Application note - Human CD4 CD25 regulatory T cell isolation, in vitro expansi.pdf (391.06 KB, 下载次数: 32)
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发表于 2021-5-13 13:57:34 | 显示全部楼层
想请教下楼主,您磁珠分选后的Treg纯度有多少呢?我也遇到了类似的问题,刚刚磁珠分选完测CD4+CD25+Treg纯度大概有60%,养了3天后纯度下降只有不到30%,CD4+CD25-的细胞扩增污染了原本的Treg,这个问题得不到解决,我也很苦恼,想跟你探讨
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 楼主| 发表于 2021-5-13 14:40:14 | 显示全部楼层
lalasa 发表于 2021-5-13 13:57
想请教下楼主,您磁珠分选后的Treg纯度有多少呢?我也遇到了类似的问题,刚刚磁珠分选完测CD4+CD25+Treg纯 ...

因为每次分选出来的Treg比较少(不到100万),都用来扩增了,没有测纯度。个人感觉刚分出来纯度60%是偏低了,建议还是先优化一下分选条件,还有扩增的时候加雷帕霉素抑制非Treg细胞增殖。

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