流式实验每次都要做同型对照和FMO对照吗

xyf许燕芬

Yooooo

    我也刚开始做流式，谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的，原理什么的都能查到就不说了。之前问技术，技术告诉我说，同型对照在上机的时候就是调节电压，电压感觉还挺重要的，我做了几次都没调好，样品的结果都飘出去了。FMO对照主要是看你做几个颜色吧，两个以上，且有重叠应该是要做的。
     以上是我的理解，表达的可能有些不规范，或者错误。希望老师指正。

飞翔

看你的具体实验方案，实验目的，以前是都加，做得多了不是每次都加

niwanmao

Yooooo 发表于 2021-4-19 11:14
我也刚开始做流式，谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的，原理什么的都能查到就不说了。之前问技术 ...

同型其实可以搜一下站内以前发过的资料，不是用于调节电压。
调节电压，应该是空白对照。
同型对照，如果是真正的isotype，用做设门参照没问题，但关键是绝大多数情况下，大家无法找到正确的isotype，因此其设门意义渐渐被淡化。
随着多色流式的盛行，荧光渗漏成为背景信号最重要的来源，因此FMO渐渐被重视，所以每一批实验，尽量做一次FMO，同时事先进行Fc阻断。

xyf许燕芬

Yooooo 发表于 2021-4-19 11:14
我也刚开始做流式，谈论一下我的理解吧。同型应该是有必要的，原理什么的都能查到就不说了。之前问技术 ...

我现在做3色，想看下3种细胞的比例，但是总的细胞数量不是很多，之前做了一次只做了一个阴性对照，想着是不是做下其他对照设门比较准确，还想问下同型和FMO对照的话最少的细胞量是多少，还有抗体的用量大概是多少，刚开始做没啥经验，希望您分享下经验

niwanmao

xyf许燕芬 发表于 2021-4-21 15:32
我现在做3色，想看下3种细胞的比例，但是总的细胞数量不是很多，之前做了一次只做了一个阴性对照，想着是 ...

同型对照和FMO细胞量和实验组一样。抗体用量，尽量通过抗体滴定（可站内搜索这个关键词找步骤）确定。

Yooooo

niwanmao 发表于 2021-4-19 18:02
同型其实可以搜一下站内以前发过的资料，不是用于调节电压。
调节电压，应该是空白对照。
同型对照，如果 ...

我当时询问技术，技术说同型也就相当于阴性对照了，然后，做了同型就没必要再做空白了。感谢老师制作，我再学习一下。

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2021-4-21 20:32
同型对照和FMO细胞量和实验组一样。抗体用量，尽量通过抗体滴定（可站内搜索这个关键词找步骤）确定。 ...

倪老师你好，刚到一个新公司。这边有关于抗体标记的百分比的算法是 正常染色的百分比-iso的百分比。 想问一下这样的计算方式合理么？

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2021-4-28 16:49
倪老师你好，刚到一个新公司。这边有关于抗体标记的百分比的算法是 正常染色的百分比-iso的百分比。 想问 ...

这个算法是ELISA的算法。如果你们公司认定了这样，那就合理。但在流式上一般都不这样子。

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2021-4-28 17:56
这个算法是ELISA的算法。如果你们公司认定了这样，那就合理。但在流式上一般都不这样子。 ...

好的。那一般来说 是 iso在合理范围内，就可以直接读数据就行了吧