小鼠的淋巴结制备单细胞悬液的技术

deepfeeless

请教小鼠的淋巴结如何制备单细胞悬液才能得到更好的数据呢？想要研究淋巴结内免疫细胞的情况。最近的问题时，淋巴结取得很轻松，但是流式结果中却并没有得到足够的细胞，活细胞数很少，不足以支持数据分析。特来请教大家！
我的方法是，安乐死已有肿瘤的小鼠，经心脏灌注后取腋下淋巴结，腹股沟淋巴结。取到的淋巴结放置于培养皿中，倒入不含钙和镁的PBS溶液，置于冰上。回到实验室后将淋巴结用注射器末端研磨经70um过滤网滤过后收集入50mL锥形管中，离心500g 5min 4℃，重悬于1ml 1xPBS 然后进行不同通道的染色。其实离心后看到的细胞沉淀就很少，不知道是不是解离的不够好，而且我需要用这些少量的细胞跑不同的panel，所以数据显示的细胞数量很少。

我看到有文章用到ACK lysis，不知道有没有大神指点一下。看看有没有可能得到更多的细胞。谢谢啦！

niwanmao

可参考：
小鼠脾脏、淋巴结组织体外诱导分化Th1/Th2/iTreg/Th17详细步骤
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7813-1-1.html
(出处: 流式中文网)

deepfeeless

niwanmao 发表于 2021-4-22 20:53
可参考：
小鼠脾脏、淋巴结组织体外诱导分化Th1/Th2/iTreg/Th17详细步骤
https://www.flowcyto.cn/bbs/thre ...

谢谢老师！我在“实体组织酶消化指导手册”中看到肺癌引流区域淋巴结的单细胞制备中用到了collagenase type IV, 在文献的细则中看到他们使用了 RBC lysis。而我做的步骤和您回复中指出的参考几乎是一致的，但是细胞数量并没有达到预期，也许是因为我的panel太多导致的，但是我不知道还有没有别的方法。因为我研磨后离心看到的细胞沉淀并不多…但其实淋巴结不算小…

Jeffery_9

deepfeeless 发表于 2021-4-22 21:48
谢谢老师！我在“实体组织酶消化指导手册”中看到肺癌引流区域淋巴结的单细胞制备中用到了collagenase ty ...

我也遇到了这个问题，请问你解决了吗？