全血裂解后，图形改变的问题

闷油瓶

老师们好，我们在做全血流式检测的时候，一般抗体孵育完会用专用的裂解液进行裂红，但是有时候会发现裂红不彻底，就再用灭菌注射用水再裂一次红细胞，可是发现裂完，在CD45与SSC散点图上，有些细胞明显上飘了（SSC值变大），这部分上漂的细胞是啥？应该不是细胞碎片吧？细胞碎片和粘连体是不是得从FSC和SSC里面去确定？

niwanmao

用水裂解，低渗作用太厉害，所以同时也导致一些中性粒细胞被胀大或者发生变化。

建议还是用久经考验的氯化铵裂解液，配方站内有。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-4-26 10:49
用水裂解，低渗作用太厉害，所以同时也导致一些中性粒细胞被胀大或者发生变化。

建议还是用久经考验的氯化 ...

老师你好，我们就是买的商业化的裂解液，裂完之后离心发现有的样本中沉底还是比较红，所以又用灭菌水裂了一遍，就出现了上图中部分SSC值变大的问题，是不是因为灭菌水进入细胞内部，导致细胞内部细胞器发生裂解导致的？

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-4-26 14:17
老师你好，我们就是买的商业化的裂解液，裂完之后离心发现有的样本中沉底还是比较红，所以又用灭菌水裂了 ...

低渗本身就是对细胞造成破坏，更不用说水了。建议氯化铵。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-4-27 20:36
低渗本身就是对细胞造成破坏，更不用说水了。建议氯化铵。

好的，谢谢

Arial

闷油瓶 发表于 2021-4-26 14:17
老师你好，我们就是买的商业化的裂解液，裂完之后离心发现有的样本中沉底还是比较红，所以又用灭菌水裂了 ...

裂红不完全可能是因为时间太短，但是时间太长也会对细胞造成一定的破坏，裂红期间可以来回翻转一下让裂红更充分，此外可以使用裂红液进行二次裂红.

闷油瓶

Arial 发表于 2021-4-29 11:03
裂红不完全可能是因为时间太短，但是时间太长也会对细胞造成一定的破坏，裂红期间可以来回翻转一下让裂红 ...

对，这个我明白，只是比较好奇为啥裂完之后一部分细胞的SSC值变大了

tiger

闷油瓶 发表于 2021-4-29 21:18
对，这个我明白，只是比较好奇为啥裂完之后一部分细胞的SSC值变大了

用水裂解后，由于低渗作用细胞水肿涨大，SSC就会变强。其实，我看你用了CD45，完全可以㳽补裂解不彻底的问题，把阈值设在CD45通道，不收阴性细胞就可以了。