查看: 1221|回复: 1
收起左侧

[流式protocol] OMIP-067单管28色方案,分出人T细胞功能亚群、活化、Tfh、Tre...

  [复制链接]
 楼主| 发表于 2021-5-5 21:08:26 | 显示全部楼层 |阅读模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
T细胞在介导针对多种传染病和肿瘤的免疫反应中起着至关重要的作用。T细胞非常多样化,包括具有不同功能的多个亚群。开发能够有效、全面地评估疫苗或感染后不同T细胞群体的表型和功能异质性的技术,对于定义保护性免疫相关性并开发更有效的疫苗至关重要。因此,需要制定一个单管方案,可全面评估各种各样的表型、活化标记和细胞因子,这对于高通量的研究将非常有效的,尤其是在采血量有限的婴幼儿的临床试验中。

Phillip A. Swanson II等人设计了单管28色OMIP,可对来自任何年龄的样品中的αβ和γδT细胞亚群进行全面的表型和功能分析。

方案
20210505_210345.jpg


设门详解
接触抗原后,初始CD4和CD8αβT细胞(图1A)迅速扩增并分化为记忆和/或效应细胞,各自有着独特的功能,可以通过表面标记物的组合进行区分。方案中包括了用于区分初始、效应(Tef)、效应记忆(Tem)和中央/过渡记忆T细胞(Tcm/Ttm)的标记CCR7和CD45RA。
20210505_210015.jpg 20210505_210040.jpg

该方案还包括几个标记,以检测抗原刺激后的T细胞活化。 与抗原接触后,CD38和HLA-DR在αβ和γδT细胞上调,并显示与疟疾疫苗接种后的保护作用相关。
20210505_210104.jpg

CD154是CD4 T细胞活化标记,对于高亲和力抗体反应的发展至关重要,并且可以导致树突状细胞活化。 此外,CD154的表达可用于确定体外刺激后抗原特异性CD4+T细胞的比例,因为它在基本上所有抗原特异性细胞上都表达。 最后,该方案还包括激活标记CD69,以帮助在体外进行抗原特异性刺激后检测产生低水平细胞因子的细胞。

方案中还包括用于鉴别两个特殊CD4+T细胞亚群的标记,这两个亚群在接种疫苗后的调节免疫反应中起重要作用。首先是TfH细胞,这是位于次级淋巴器官的专职CD4 T细胞,对帮助B细胞产生保护性抗体应答至关重要。血液中的非初始CXCR5 + CD4 T细胞与传统TfH细胞具有相似的遗传、表型和功能特征,被称为血TfH细胞。重要的是,血TfH细胞的比例已显示出与保护性抗体反应直接相关。血TfH细胞可以使用标记PD-1和CXCR3进一步分为不同的功能亚群。
20210505_210111.jpg
20210505_210138.jpg

其次是Treg,在负性调节免疫细胞导致的炎症中起重要作用​​,并可能影响疫苗反应,本方案使用标记CD25和CD127来识别血液中的Treg。
20210505_210118.jpg


活化的T细胞迅速分化并获得产生细胞因子的能力,该能力可能会因多种因素而异,包括刺激性抗原的性质、先天环境和个体年龄。方案中还包括了用于检测T细胞功能的多种标记物。这些包括了典型的细胞因子:IFNγ、TNF和IL-2,它们在介导针对肿瘤和多种传染病(包括疟疾)的保护中起着重要作用。还包括由Th2细胞产生的细胞因子IL-4、IL-5和IL-13,这些细胞因子在预防某些寄生虫感染中可以发挥重要作用,但也与变态反应和哮喘有关,并且可以对抗调节Th1反应。值得注意的是,新生儿和婴儿更倾向于产生Th2细胞因子,因此在婴儿疫苗研究中评估它们很重要。最后,IL-21因其在TfH介导的保护性抗体应答中的重要作用以及在维持T细胞记忆的功能中的重要作用,故也设计在方案中,可以作为疫苗效力的预测指标。
20210505_210129.jpg
20210505_210148.jpg


在衰老过程中,胸腺输出减少,T细胞部分会转变为更具抗原性的表型。 方案中纳入CD31与CD45RA,组合起来可区分RTE,这类细胞在婴儿中比例很高,在刺激后会主要分泌IL-8,反而Th1、Th2或Th17细胞因子较少。因此,将IL-8放在方案中,可评估RTE的功能。
20210505_210157.jpg


γδT细胞是一组非常规T细胞,与多种不同类型的感染相关。可以通过表达T细胞受体的Vδ1或Vδ2链来鉴定人血中的两个主要亚群。 Vδ1+和Vδ2-γδT细胞与传统的αβT细胞相似,因为它们具有多样化的受体库,在抗原接触后开始出现多样化减少。可以使用标记CD27和CD127区分初始Vδ1+或Vδ1/ 2-γδT细胞,用CD27和CX3CR1鉴定经历克隆扩增的细胞。另一方面,Vδ2+T细胞通常具有不变的TCR。大多数Vδ2+ T细胞与Vγ9链配对,并在接种疫苗后产生针对疟疾的免疫力中发挥重要作用。但是,一小部分Vδ2+T细胞为Vγ9-,在对病原体的反应方面更类似于Vδ1+和Vδ1/2-γδT细胞。
20210505_210209.jpg



参考文献:Swanson, Phillip A 2nd, and Robert A Seder. “OMIP-067: 28-Color Flow Cytometry Panel to Evaluate Human T-Cell Phenotype and Function.” Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology vol. 97,10 (2020): 1032-1036. doi:10.1002/cyto.a.24189

本帖被以下淘专辑推荐:

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-8-23 09:34:40 | 显示全部楼层
太有用了,谢谢,优秀!
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2021-12-6 03:45

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.