pbmc流式分群问题

刚刚刚

仪器是BD的C6
溶血素是BD的FACS Lysing Solution红细胞裂解液

以前处理全血样本一直都没什么问题（如图1），偶尔会有PBMC分群不是很明显的情况（如图2），但是最近全都看不出来分群（图3）。很是困惑，还望战友能帮忙解答一下。（图1和图2是同一批次处理的两个样本管）


样本处理方式均为：
全血孵抗体30min（样本量50ul/管）
1X溶血素15min（1ml/每样本管）
1500rpm*3min 弃上清（倾倒）
1ml pbs 重悬

1500rpm*3min 弃上清（倾倒）
50ul pbs 重悬
上机检测

PS：想问一下溶血素过量是否会把PBMC给裂了呢？为什么会裂红，而不裂PBMC呢？

niwanmao

有两个可能性，一个是裂解液，二是样本本身状态不佳。

applebernie

实验上看貌似没啥问题，我们也是50ul全血，不过裂解用的是2mL的bd facs lysing，从来没有问题，之后再离心倒掉上清，2ml pbs洗一遍再离心完了倒掉上清直接上机。就算是隔了一天多的样本跑出来还是可以的。你们有用BD的Multi Check control么？

刚刚刚

applebernie 发表于 2021-5-12 13:19
实验上看貌似没啥问题，我们也是50ul全血，不过裂解用的是2mL的bd facs lysing，从来没有问题，之后再离心 ...

没有用过诶，你们用的溶血素量好大呀。。。。说明书上100ul全血才用2ml了