问一个关于补偿的问题。

闷油瓶 · 发表于 2021-5-10 17:22:01

各位老师，问一个关于补偿的问题，大家平时所说的横平竖直是指在用单染管进行补偿调节时候遵循的原则，这个容易理解，但是对于一个给定的双色流式散点图来说，还能直接看出补偿效果吗？毕竟是两种颜色的图谱了。我想知道这个时候怎样判断补偿是否正确。
如图，是我用过去设好的模板检测的NKT流式图谱，用的是CD3和CD56双染色来鉴定百分比，可以看到，双阴性的细胞是比较少的，要么是单阳性细胞，要么是双阳性细胞，就CD3指标来说，无论CD56阳性的群体还是阴性的群体，两个群体保持了很好的竖直。但是对于CD56指标来说，CD3阳性和阴性的两个群体在CD56的荧光强度上并没有保持所谓的横平，我有一个疑问，造成没有横平的原因是什么？是补偿没有调节好？还是说人家本来就是这么分群的？本来就是CD3阴性的群体中CD56的荧光强度本就比CD3阳性群体中CD56的荧光强度强？如果是本来就强的话，那么是不是就看不出来补偿是否是合格的了？因为我们很多样本用这个模板测出来都是这样的斜率，所以比较好奇。

半年y · 发表于 2021-5-10 18:40:53

多色有经验的话也可以直接调补偿。关于CD56阳性荧光强度有差异可能是因为这两种细胞表达该marker的水平不一样。你这两个分别是什么荧光通道也没显示，另外问一句这是什么样本居然左下角阴性那里没有细胞上一级门是什么？

闷油瓶 · 发表于 2021-5-10 21:07:01

半年y 发表于 2021-5-10 18:40
多色有经验的话也可以直接调补偿。关于CD56阳性荧光强度有差异可能是因为这两种细胞表达该marker的水平不一 ...

上一级们就是散射光的图，圈的淋巴细胞，这是刺激过的，主要就是CD3阳的细胞，是通过FITC和PE通道检测的

niwanmao · 发表于 2021-5-10 21:20:43

你没理解横平，横平并非指这里两群蓝色，而是B3和B4两个象限。
竖直也没理解对，是指B1、B3两个。
你这里缺失B3象限的群体，所以补偿调节是没有客观依据的。

闷油瓶 · 发表于 2021-5-10 21:25:15

niwanmao 发表于 2021-5-10 21:20
你没理解横平，横平并非指这里两群蓝色，而是B3和B4两个象限。
竖直也没理解对，是指B1、B3两个。
你这里缺 ...

老师您好，您说的我理解了，接着您刚才的话题，是不是说如果我的B3象限里有细胞的话，我只要比较一下B1与B3是不是在同一个竖直线上，B3与B4是不是在一个水平线上，如果这两者都满足的话，就说明我的补偿是基本合格的了？而B2里的双阳性细胞是不能拿来与其他象限比较去判断补偿是否合适的？

半年y · 发表于 2021-5-10 22:59:58

闷油瓶发表于 2021-5-10 21:25
老师您好，您说的我理解了，接着您刚才的话题，是不是说如果我的B3象限里有细胞的话，我只要比较一下B1与 ...

是什么组织吗还是说分选后的不应该没有双阴性部分啊

闷油瓶 · 发表于 2021-5-11 19:48:33

半年y 发表于 2021-5-10 22:59
是什么组织吗还是说分选后的不应该没有双阴性部分啊

这是用单个核细胞经抗体刺激培养后的细胞

11111 · 发表于 2021-5-14 11:28:10

CD56在NK和NKT表达量不一样嘛

闷油瓶 · 发表于 2021-5-14 21:13:54

11111 发表于 2021-5-14 11:28
CD56在NK和NKT表达量不一样嘛

这个倒是不清楚，应该有表达强度的差异吧

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