细胞分化流式检测封闭0.5 %BSA可否用奶粉替代？

qyj2017

实验室恰好最近BSA断货，流式检测细胞分化表面抗原需要使用0.5%BSA封闭非特异性结合，以前一直用的BSA，不知道奶粉可不可以？也是0.5%d的比例吗？
希望有知道的大神可以帮助，感谢！

qyj2017

@niwanmao 请问倪老师有相关的经验吗？我只知道WB可以用牛奶封闭，但流式这个我还真没试过，样本比较宝贵，着急中。。。

niwanmao

qyj2017 发表于 2021-5-11 21:34
@niwanmao 请问倪老师有相关的经验吗？我只知道WB可以用牛奶封闭，但流式这个我还真没试过，样本比较宝贵， ...

不能用奶粉，因为WB是针对纸上的抗原位点，而流式是游离的细胞。
不封闭也可以先做啊，不是每个抗体检测都需要，只有那些检测后你发现比较明显非特异性结合的，才需要。

qyj2017

niwanmao 发表于 2021-5-11 22:42
不能用奶粉，因为WB是针对纸上的抗原位点，而流式是游离的细胞。
不封闭也可以先做啊，不是每个抗体检测 ...

谢谢倪老师！长知识了。。

fc563384240

niwanmao 发表于 2021-5-11 22:42
不能用奶粉，因为WB是针对纸上的抗原位点，而流式是游离的细胞。
不封闭也可以先做啊，不是每个抗体检测 ...

倪老师，您好。我第一次尝试用做FC封闭。请问您那有BSA封闭FC的流程吗？

飞翔

fc563384240 发表于 2022-2-9 11:09
倪老师，您好。我第一次尝试用做FC封闭。请问您那有BSA封闭FC的流程吗？

流式可以用BSA封闭吗？一般是用抗体同种属血清或者与细胞Fc结合的抗体去封闭，Fc blcoking 有商品化的可以选择呀

fc563384240

飞翔 发表于 2022-2-9 15:21
流式可以用BSA封闭吗？一般是用抗体同种属血清或者与细胞Fc结合的抗体去封闭，Fc blcoking 有商品化的可 ...

是的 有专用的fc-B 主要是我们实验室现在没有这个 我看也有人说流式是可以用BSA 阻断的 所以我想试试：）

niwanmao

fc563384240 发表于 2022-2-9 17:07
是的 有专用的fc-B 主要是我们实验室现在没有这个 我看也有人说流式是可以用BSA 阻断的 所以我想试试：） ...

BSA有效果，但不会太好。
人的最好用IgG
小鼠最好用专用的Fc Blocking试剂（主要是针对CD16/CD32的）。

fc563384240

niwanmao 发表于 2022-2-9 18:25
BSA有效果，但不会太好。
人的最好用IgG
小鼠最好用专用的Fc Blocking试剂（主要是针对CD16/CD32的）。 ...

嗯嗯 好的 谢谢倪老师！

lukequ

niwanmao 发表于 2022-2-9 18:25
BSA有效果，但不会太好。
人的最好用IgG
小鼠最好用专用的Fc Blocking试剂（主要是针对CD16/CD32的）。 ...

小鼠的封闭我用biolegend的Purified anti-mouse CD16/32 Antibody，我见说明书上使用量是说：For flow cytometric staining, the suggested use of this reagent is ≤ 1.0 µg per million cells in 100 µl volume.，翻译过来意思不是使用量小于等于1微克吗，这样的活我用0.1微克也可以吧，还是我翻译错误，是不是应该是用量大于等于1.0微克啊。