用5个标记，仅用流式，详尽剖析10余种细胞死亡方式

niwanmao

最近几年，将细胞死亡方式进一步细分为：
I型（程序性细胞死亡，即凋亡）
II型（自噬性细胞死亡）
III型（程序性坏死）

也有另外一种方式将细胞死亡分为：
程序性细胞死亡（PCD，体内稳态性和胚胎性）
偶发细胞死亡（ ACD，胀亡）
受调节的细胞死亡（RCD），包括细胞凋亡、坏死性凋亡、自噬、依赖性细胞死亡或过度的DNA损伤反应（简称DDR，如pH2AX磷酸H2AX组蛋白）引起的Poly（ADP-核糖）聚合酶（PARP）过度活化

这样的细分，对于理解细胞死亡的复杂性有很好的帮助。

但上述分类中，均未包括RIP1-（与受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1）依赖性凋亡或RIP1/RIP3/caspase-3细胞的现象，所以细胞死亡的的命名和定义还是应定期修正的。

虽然ACD和RCD的机制和检测方法不是非常完善，但在流式上还是可以进行检测的。如下图，利用Zombie、caspase-3、RIP-3、pH2AX、cleaved PARP等标记，可在流式上将细胞状态分为以下几类：



设门分析的示意图如下：

ACD和RCD途径。
（A）活细胞可以在药物处理后经历早期凋亡（EAPO）或胀亡、早期凋亡，最后到晚期凋亡（LAPO），然后在细胞降解后变为胀亡或坏死表型。 （B）活细胞在静息时可能表达RIP3+ve/caspase-3–ve，在坏死性凋亡时可能是RIP3high + ve / caspase-3–ve，或者是双阴性（DN）。 EAPO细胞会丢失RIP3，或者如果保留，则会经历RIP1依赖性细胞凋亡（RIP1-APO）。 EAPO细胞也可以RIP1+ve。 （C）质膜完整性的丧失或细胞死亡导致（B）中反映的细胞表型，细胞降解形成DN群体。 （B，C）活细胞和死细胞表型也可以表达pH2AX（DDR）或切割后的PARP（细胞凋亡），也可以最终同时表达两种蛋白质（D，E），从而导致两种情形：在活化caspase-3存在时使PARP的pH2AX过度活化； 在没有caspase-3的时候导致依赖性细胞死亡。
箭头指示的细胞群变化的方向。


参考文献：Vossenkamper A, Warnes G. Flow Cytometry Reveals the Nature of Oncotic Cells. Int J Mol Sci. 2019 Sep 6;20(18):4379. doi: 10.3390/ijms20184379. PMID: 31489916; PMCID: PMC6769836.

13249133143

老师您好，请问凋亡、程序性坏死、焦亡、铁死亡、自噬性死亡 各自公认的流式标记是什么？

niwanmao

13249133143 发表于 2022-5-5 17:12
老师您好，请问凋亡、程序性坏死、焦亡、铁死亡、自噬性死亡 各自公认的流式标记是什么？ ...

参见我们之前的文章：

居然还有焦亡？细胞死亡的形式和对应的流式检测汇总
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5431-1-1.html
(出处: 流式中文网)

13249133143

一种代表细胞marker，一种代表死亡蛋白，通过这样双染流式分析在组织中的占比。请问老师这样可行吗？科学吗？

13249133143

分析在组织中的死亡占比

niwanmao

13249133143 发表于 2022-5-6 17:19
一种代表细胞marker，一种代表死亡蛋白，通过这样双染流式分析在组织中的占比。请问老师这样可行吗？科学吗 ...

可以的，只是只选一种应该不够，至少要多几种标记，确保特异性。

13249133143

niwanmao 发表于 2022-5-6 18:24
可以的，只是只选一种应该不够，至少要多几种标记，确保特异性。

几种标记可以分开染吗？我的抗体基本都要与二抗偶联发光，一般都只能做到双染

niwanmao

13249133143 发表于 2022-5-7 20:59
几种标记可以分开染吗？我的抗体基本都要与二抗偶联发光，一般都只能做到双染 ...

谁说二抗间标只有做双染的？直标的可以一起做啊。

13249133143

没有直标的抗体 目前我是想补个实验，通过流式分析组织里几种细胞的死亡情况。通过一些marker标记细胞，再标记死亡核心分子，双染流式分析其中的占比。这些抗体都是需要偶联二抗发光，跟免疫荧光一样，甚至一些抗体没有流式的应用，只有IF。 老师评价一下这样的操作可行性怎么样

niwanmao

13249133143 发表于 2022-5-8 15:41
没有直标的抗体 目前我是想补个实验，通过流式分析组织里几种细胞的死亡情况。通过一些marker标记细 ...

你指的是区分细胞群体的标记没有直标？那很简单，买无标记的抗体，再买一个标记试剂盒，自己做成直标抗体即可。