现在做巨噬细胞向成纤维细胞表型转化的流式，但是出了很多问题。
1.使用细胞为RAW264.7细胞系以及提取的骨髓来源的巨噬细胞，但是两者都是F4/80（巨噬细胞标记物） 阳性很低，大概30%左右（且单阳性表达基本为0，），而α-SMA阳性率很高，85%以上，细胞问题？抗体问题？RAW264.7为第7、8代，F4/80抗体是FITC通道，SMA为APC通道，biolegend公司。
2.固定和破膜问题：本次并没有固定和破膜，但是F4/80在膜表达，SMA在细胞质表达较多。
3.封闭问题：最近查阅得知巨噬细胞表面有较多FC受体表达，需要封闭，请问封闭影响大吗？有国外的老师指导说没有封闭结果也很好。
如果封闭，除了用CD16/CD32，血清封闭效果如何，若是直接染色法，血清种属怎么选择；若是间接染色，血清种属怎么选择？
4.抗体孵育时，是在4度还是室温25左右孵育效果更好一些？
5.死细胞对染色结果的影响？是否需要染色前先去除死细胞，还是在圈门的时候去除呢？在染色过程中怎么保持细胞活性呢？
6.后期还需要进行巨噬细胞的分型检测M1和M2，希望能先学习一下大家的经验。
刚刚接触流式，小白一枚，问题很多，望各位赐教，不胜感激!!!
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发表于 2021-5-14 19:39:35
发表于 2022-1-22 16:29:44
