请教一个关于同型对照的问题

闷油瓶

之前测CD90、CD14等指标时用着同型对照，都是PE标记的。后来换了另一个厂家的同型对照，上样发现荧光非常强，都达到了阳性水平，而且我的细胞（MSC）之前测CD90也就98%左右，这次换了新的同型，同型在CD90上的指标大概都有80%了，这是为啥？就算非特异性染色强，也不至于这么强吧？是不是给我发成抗体了？还是说模板需要调？（一直用的固定的模板）

niwanmao

我们一般如果换抗体，肯定要与之前的做比对，假如比例和分群与以前质量好的抗体相差大，肯定要放弃用。像你这个情况，问题应该出在抗体上的可能性比较大，先再试试低浓度滴定看看，还是不行，建议还是退货吧。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-23 10:40
我们一般如果换抗体，肯定要与之前的做比对，假如比例和分群与以前质量好的抗体相差大，肯定要放弃用。像你 ...

抗体没换，只换了同型对照，这也是为了省钱，之前的同型太贵，结果换的便宜的同型直接成阳性指标了，我都感觉不能用，没有调的必要了哈哈哈

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-23 10:40
我们一般如果换抗体，肯定要与之前的做比对，假如比例和分群与以前质量好的抗体相差大，肯定要放弃用。像你 ...

如果只换同型的话，同型对照也需要滴定吗？

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-23 19:48
如果只换同型的话，同型对照也需要滴定吗？

说明这个同型跟你的检测抗体不匹配。
另外，再关注一下同型的抗体类型：
同型对照荧光比抗体强，咋办？阻断！
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html
(出处: 流式中文网)

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-23 21:10
说明这个同型跟你的检测抗体不匹配。
另外，再关注一下同型的抗体类型：
同型对照荧光比抗体强，咋办？阻 ...

我们为了便宜才换的同型对照，如果新同型得用阻断的话，我还是建议他们多花点钱把同型换回来哈哈哈，对了，我记得之前看贴说是克隆号挺重要的，那是针对抗体的吗？同型的话，注重以下亚型和种属就差不多了吧？亚型是从哪里查的？

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-24 08:33
我们为了便宜才换的同型对照，如果新同型得用阻断的话，我还是建议他们多花点钱把同型换回来哈哈哈，对了 ...

克隆号主要是针对常规抗体。同型还是需要同一厂家出的相对好一点。光比较亚类可能还不够。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-24 09:50
克隆号主要是针对常规抗体。同型还是需要同一厂家出的相对好一点。光比较亚类可能还不够。
...

对，就是买的同一个厂家的，之前不是一个厂家的用着都没啥问题，这次换成了一个厂家，问题倒这么严重，都怀疑商家装错了，装成抗体了

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-24 10:57
对，就是买的同一个厂家的，之前不是一个厂家的用着都没啥问题，这次换成了一个厂家，问题倒这么严重，都 ...

可能有些技术不够硬的厂家他们自己都不理解同型应该如何选择，可能随便搭了一个。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-24 17:48
可能有些技术不够硬的厂家他们自己都不理解同型应该如何选择，可能随便搭了一个。 ...

今天又试了一下，染了一下血液细胞，几乎都是阴性的，又染了一下MSC，结果接近100%都是阳性的，太奇怪了，应该不是非特异性结合那么简单，估计这个同型对照的蛋白分子正好在MSC上有与之特异性结合的抗原存在