稳转单克隆细胞系在流式软件中的显示问题

风萧易水

问题描述：我之前构建了一株CT26-CD19的稳转细胞系，经过BD C6流式检测后用flowjo处理结果是98%的GFP和CD19双阳性的，这次我重新上机，用的是FACSMelody的仪器，之后用flowjo处理结果变成了如图所示92.5%的双阳性，我关注的是Q1象限里面7%的PE阳性是什么原因，如果这7%全部在Q4象限我也可以理解的。

niwanmao

PE通道是CD19？

风萧易水

niwanmao 发表于 2021-5-27 15:01
PE通道是CD19？

是的老师，这次抗体也换过了，CD19抗体偶联PE荧光

niwanmao

风萧易水 发表于 2021-5-28 09:09
是的老师，这次抗体也换过了，CD19抗体偶联PE荧光

如果C6上面98％，换台机器不应该相差如此大。在FACSMelogy机器上也是如此吗？

风萧易水

niwanmao 发表于 2021-5-28 13:26
如果C6上面98％，换台机器不应该相差如此大。在FACSMelogy机器上也是如此吗？ ...

这个图片就是在FACSMelody仪器上的样

niwanmao

风萧易水 发表于 2021-5-30 19:51
这个图片就是在FACSMelody仪器上的样

是否与细胞状态和染色时的pH值等有关，例如这篇文献所说的那样：Alnuami AA, Zeedi B, Qadri SM, Ashraf SS. Oxyradical-induced GFP damage and loss of fluorescence. Int J Biol Macromol. 2008 Aug 15;43(2):182-6. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2008.05.002. Epub 2008 May 8. PMID: 18561996.

tiger

风萧易水 发表于 2021-5-30 19:51
这个图片就是在FACSMelody仪器上的样

有可能GFP-CD19+是死亡细胞，你确认一下

风萧易水

tiger 发表于 2021-5-31 08:36
有可能GFP-CD19+是死亡细胞，你确认一下

这批细胞我上样前是计过数的，存活率挺高的

tiger

风萧易水 发表于 2021-5-31 09:59
这批细胞我上样前是计过数的，存活率挺高的

用的什么染料？

风萧易水

niwanmao 发表于 2021-5-31 07:54
是否与细胞状态和染色时的pH值等有关，例如这篇文献所说的那样：Alnuami AA, Zeedi B, Qadri SM, Ashraf  ...

之前我也构建过许多稳转细胞系，都是GFP和CD19双阳的，比如图中两种细胞系，也都是在C6仪器上面检测的，下机后调完补偿觉得也正常，但是一到FACSmelody上机结果就这样，结果看着很奇怪，之前那些细胞系也没有去考虑PH之类的问题。