用自制抗原检测细胞表面抗体

wgz2414

本人用毕赤酵母表达的蛋白作为抗原偶联染料后去检测细胞表面的抗体，但是经流式检测后发现该蛋白与阴性细胞也有很强的结合。做流式前细胞均用1%FBS进行了封闭。出现这种情况会不会是因为血清中的抗体与检测用的蛋白发生了结合？改用BSA进行封闭是否可行?因为是自己做的蛋白偶联染料，有没有可能存在没有完全去除的游离染料与细胞直接发生了结合？请论坛的各位大神赐教。

niwanmao

自己制备的话，存在很多变数，例如这个抗原结合的特异性是不是本身就低？所以导致本来应该阴性的也结合上去了

wgz2414

niwanmao 发表于 2021-6-17 22:02
自己制备的话，存在很多变数，例如这个抗原结合的特异性是不是本身就低？所以导致本来应该阴性的也结合上去 ...

抗原的特异性应该是不低的，因为当初就是用这个抗原的序列制备的抗体

niwanmao

wgz2414 发表于 2021-6-18 15:47
抗原的特异性应该是不低的，因为当初就是用这个抗原的序列制备的抗体

这个是要用专业的方法去评估的，具体用什么方法我说不出来，因为是抗体制备这个领域的专业。
但我相信，仅凭“用这个抗原序列制备的抗体”就有特异性，这样的说法是站不住脚的。