胞内染色固定和破膜，是不是会使GFP失效？

liyingqilyq

请问如何通过胞内染色去流式检测到GFP？

niwanmao

乙醇固定肯定不行。
多聚甲醛，固定有技巧，可以优化，见文献（https://www.future-science.com/doi/pdf/10.2144/000113780），里面提到，0.5％固定半小时以上，或1％固定15分钟以上，可保留YFP的荧光，所以对于GFP，也是类似。稳妥起见，我建议你可以用1％固定30分钟以上。

飞翔

niwanmao 发表于 2021-6-21 15:00
乙醇固定肯定不行。
多聚甲醛，固定有技巧，可以优化，见文献（https://www.future-science.com/doi/pdf/10 ...

倪老师，你好，问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效

niwanmao

飞翔 发表于 2021-6-21 16:02
倪老师，你好，问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效

这方面问题暂时未看到。你碰到了？

sunny2829

飞翔 发表于 2021-6-21 16:02
倪老师，你好，问下胞内染色中固定及破膜对细胞的CFSE是否会失效

看了BD CFSE说明书，不会失效哦。看下图以及说明书 [url=]565082 BD CFSE.pdf[/url]

飞翔

sunny2829 发表于 2021-6-22 10:25
看了BD CFSE说明书，不会失效哦。看下图以及说明书565082 BD CFSE.pdf

刘小六

打扰！我昨天做了转染细胞后的Ki67破膜染色，发现eGFP荧光完全丢失，用的是赛默飞的破膜液，不懂是不是会有影响

niwanmao

刘小六 发表于 2021-7-21 09:45
打扰！我昨天做了转染细胞后的Ki67破膜染色，发现eGFP荧光完全丢失，用的是赛默飞的破膜液，不懂是不是会有 ...

建议参考2楼的固定方法，然后再用Thermo的破膜剂。

刘小六

niwanmao 发表于 2021-7-21 17:19
建议参考2楼的固定方法，然后再用Thermo的破膜剂。

好的，谢谢您！

huoyingying

求问， anti-human Lineage Cocktail(CD3,CD14,CD16,CD19,CD20,CD56)表染后，再对细胞破膜，会导致该通道的阴性群消失吗？也就是说我在破膜后上机，lin-的群不见了