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[结构和原理] 流式分析GFP为什么会分群?

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发表于 2021-6-22 21:20:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
如图所示,FITC代表GFP所染的细胞群,为什么会出现分群这种情况,是细胞本身的状态还是GFP转染的不行?很遗憾的是,我没有染死活

GFP分群

GFP分群
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发表于 2021-6-22 21:50:48 | 显示全部楼层
非特异性荧光?
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 楼主| 发表于 2021-6-22 22:14:42 | 显示全部楼层

用了FCR,请问还会出现非特异性荧光吗?
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发表于 2021-6-23 08:25:22 | 显示全部楼层
东京柑橘 发表于 2021-6-22 22:14
用了FCR,请问还会出现非特异性荧光吗?

我看帖子学到的,抗体浓度太高也会有非特异性荧光
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 楼主| 发表于 2021-6-23 08:44:52 | 显示全部楼层
闷油瓶 发表于 2021-6-23 08:25
我看帖子学到的,抗体浓度太高也会有非特异性荧光

哦哦哦,好的,那请问如何区分这两群或者有什么解决办法吗?非常感谢!
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发表于 2021-6-23 08:49:06 | 显示全部楼层
东京柑橘 发表于 2021-6-23 08:44
哦哦哦,好的,那请问如何区分这两群或者有什么解决办法吗?非常感谢! ...

抗体和细胞足够的话你可以滴定一下试试,如果没有问题,会不会是因为同时包含强表达和弱表达的原因?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-6-23 08:54:35 | 显示全部楼层
GFP的分群,可能还是跟转染后的表达量有关,可以看到绝大多数都在一起区间的。
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 楼主| 发表于 2021-6-23 08:59:09 | 显示全部楼层
闷油瓶 发表于 2021-6-23 08:49
抗体和细胞足够的话你可以滴定一下试试,如果没有问题,会不会是因为同时包含强表达和弱表达的原因? ...

对,我也考虑过强弱表达的问题,那我下次滴定一下,谢谢你~
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 楼主| 发表于 2021-6-23 09:00:38 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-6-23 08:54
GFP的分群,可能还是跟转染后的表达量有关,可以看到绝大多数都在一起区间的。 ...

那请问倪老师,能以10的四次方为界区分强弱表达吗?把这两群分开
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发表于 2021-6-23 11:52:28 | 显示全部楼层
东京柑橘 发表于 2021-6-23 09:00
那请问倪老师,能以10的四次方为界区分强弱表达吗?把这两群分开

你们的目的不是只分出GFP+部分吗?
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