流式分析GFP为什么会分群？

东京柑橘 · 发表于 2021-6-22 21:20:09

如图所示，FITC代表GFP所染的细胞群，为什么会出现分群这种情况，是细胞本身的状态还是GFP转染的不行？很遗憾的是，我没有染死活

闷油瓶 · 发表于 2021-6-22 21:50:48

非特异性荧光？

东京柑橘 · 发表于 2021-6-22 22:14:42

闷油瓶发表于 2021-6-22 21:50
非特异性荧光？

用了FCR，请问还会出现非特异性荧光吗？

闷油瓶 · 发表于 2021-6-23 08:25:22

东京柑橘发表于 2021-6-22 22:14
用了FCR，请问还会出现非特异性荧光吗？

我看帖子学到的，抗体浓度太高也会有非特异性荧光

东京柑橘 · 发表于 2021-6-23 08:44:52

闷油瓶发表于 2021-6-23 08:25
我看帖子学到的，抗体浓度太高也会有非特异性荧光

哦哦哦，好的，那请问如何区分这两群或者有什么解决办法吗？非常感谢！

闷油瓶 · 发表于 2021-6-23 08:49:06

东京柑橘发表于 2021-6-23 08:44
哦哦哦，好的，那请问如何区分这两群或者有什么解决办法吗？非常感谢！ ...

抗体和细胞足够的话你可以滴定一下试试，如果没有问题，会不会是因为同时包含强表达和弱表达的原因？

niwanmao · 发表于 2021-6-23 08:54:35

GFP的分群，可能还是跟转染后的表达量有关，可以看到绝大多数都在一起区间的。

东京柑橘 · 发表于 2021-6-23 08:59:09

闷油瓶发表于 2021-6-23 08:49
抗体和细胞足够的话你可以滴定一下试试，如果没有问题，会不会是因为同时包含强表达和弱表达的原因？ ...

对，我也考虑过强弱表达的问题，那我下次滴定一下，谢谢你~

东京柑橘 · 发表于 2021-6-23 09:00:38

niwanmao 发表于 2021-6-23 08:54
GFP的分群，可能还是跟转染后的表达量有关，可以看到绝大多数都在一起区间的。 ...

那请问倪老师，能以10的四次方为界区分强弱表达吗？把这两群分开

niwanmao · 发表于 2021-6-23 11:52:28

东京柑橘发表于 2021-6-23 09:00
那请问倪老师，能以10的四次方为界区分强弱表达吗？把这两群分开

你们的目的不是只分出GFP+部分吗？

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[结构和原理] 流式分析GFP为什么会分群？