凋亡结果与CCK8结果相差太大

danny1982 · 发表于 2021-6-23 08:46:50

我做A(肿瘤药）B(辅助药）两药的联合作用，用CCK8的结果做出来的A药IC50剂量去给药做凋亡，发现这个剂量下总凋亡率也只有10%左右，仅仅比control组多了5%，增加一倍剂量也就增加到15%，而辅助药B的给药剂量只有1/3mic50值，但是凋亡率在15%左右！两药联合的凋亡率也没有升高很多，但cck8是有明显协同作用的。请教老师，这个现象合理吗？CCK8重复很多次了，凋亡大概重复了两次。

niwanmao · 发表于 2021-6-23 08:59:44

CCK8，原理上纯粹就是测细胞活力的，而细胞活力不佳的原因，不一定只有凋亡，也可能有非凋亡途径，所以这两块数据，应该是要分开来解读。如果CCK8这个剂量能有50％细胞死亡，但是凋亡只有10％左右，我觉得你们需要找非凋亡途径的通路和依据。

danny1982 · 发表于 2021-6-23 10:39:06

本帖最后由 danny1982 于 2021-6-23 10:42 编辑

好的，谢谢倪老师指点。再请教一下细胞密度会不会有影响呢，我做CCK8用96孔板密度5k，转到12孔板做凋亡密度是20万，按照底面积来说只需要7万，但是种12孔板太稀疏了，就调整到20万，细胞数目过多会不会导致药物利用药效下降过快。

niwanmao · 发表于 2021-6-23 11:51:28

danny1982 发表于 2021-6-23 10:39
好的，谢谢倪老师指点。再请教一下细胞密度会不会有影响呢，我做CCK8用96孔板密度5k，转到12孔板做凋亡密度 ...

不能排除。一般如果要比对，从科学角度还是需要除了处理因素之外，其它因素都要一致的。

tiger · 发表于 2021-6-23 11:51:58

danny1982 发表于 2021-6-23 10:39
好的，谢谢倪老师指点。再请教一下细胞密度会不会有影响呢，我做CCK8用96孔板密度5k，转到12孔板做凋亡密度 ...

你收集细胞时收培养基上清了吗？如果丢弃上清再消化收集细胞的话，凋亡率是会很低的。

danny1982 · 发表于 2021-6-23 23:19:04

收集上清了，连洗的pbs都收集了，这个结果也是非常纳闷。

wxd · 发表于 2021-6-24 09:25:05

铺板的时候，可以结合细胞的生长速度、传代时间以及实验时间进行确定。具体要确定以下几点：1. 回想一下这个细胞在长满一个100mm（不一定是这个，但是面积一定是确定的）培养皿大概可以得到多少细胞；2. 传代是一皿传多少皿（得到铺板密度）；3. 传代后多久可以生长起来；4. 孔板上单个孔的面积是多少；5. 实验需要做多久。
铺多少细胞尽量做到：1. 结合单孔面积和铺板密度计算得到单孔铺多少细胞；2. 实验周期短于细胞长满时间。这样可以确保实验周期内，细胞只受到实验处理组因素的影响。

danny1982 · 发表于 2021-6-24 10:01:18

谢谢老师指点，“结合单孔面积和铺板密度计算得到单孔铺多少细胞”这个确实考虑过的，但是按照这个算细胞长得太稀疏了，太稀疏了也影响细胞生长的状态啊对吧。所以我在想是不是可以适当增加浓度，还是说第二天换液再次给药是不是可以。药物作用48小时收细胞的。

tiger · 发表于 2021-6-24 11:41:32

danny1982 发表于 2021-6-24 10:01
谢谢老师指点，“结合单孔面积和铺板密度计算得到单孔铺多少细胞”这个确实考虑过的，但是按照这个算细胞长 ...

做CCK8时，镜下能观察到明显的细胞坏死吗？

danny1982 · 发表于 2021-6-24 15:01:22

时间有点长我也不太记得了，也没有太仔细观察，但是可以看到细胞数是明显减少的

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[凋亡检测] 凋亡结果与CCK8结果相差太大