大家好，因为最近流式做的少，好久没来发帖子了。
这几天在做PI测定细胞周期的实验，具体来说就是先用FACS把目标细胞分出来，然后一部分用PI测细胞周期，另一部分养起来，看处理之后细胞周期如何变化。
现在的问题是，FACS分选之后立即测细胞周期的这一部分结果有点奇怪，总是多出一个峰，做了两次都是一样的结果。
第一次500，1000，2000的位置各有一个峰。
第二次1000，2000，4000的位置各有一个峰。
各个峰之间都是2倍关系，这怎么判断啊。
第一次感觉1000的位置是2N，2000是4N，500的是凋亡细胞，但是恰好是2倍关系也让我有点迷惑。
所以又重新做了一次，结果还是一模一样（包括第二峰和第三峰之间都出现了一个小峰）。
选择单细胞时是用的FSC-A/H的这种策略，可能是单细胞选的不准吗？
还有一个问题，细胞量少的时候，处理样本的时候有什么注意的小技巧吗？以第二次实验为例，FACS分选出来15万的细胞，然后固定之后离心还可以看见白色的沉淀，但洗细胞之后离心就看不见白色沉淀了，最终上样只检测到3000的细胞。。。都损失掉了，但是只是PBS冲洗了一次，没有什么过多的操作啊。怎么能保证尽量把细胞留下来啊。之前细胞量充足的情况下，从来没考虑过这个问题，最近要对分选之后的细胞进行再次染色等实验，在细胞量20万左右的情况下，因为细胞流失造成最后没有结果好几回了，最惨的一次上样时只有几百个细胞了（经过了固定，一抗孵育，二抗孵育等操作）。
希望大家有好办法可以分享一下。
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发表于 2021-6-25 09:22:17
发表于 2021-6-26 09:14:45
